人胰腺癌吉西他滨耐药细胞株中lncrna表达谱初步筛选及研究

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1、KSOOCHOWUNIVERSITY硕士学位论文论文题目人胰腺癌吉西他滨耐药细胞株中IncRNA表达谱初步筛选及研究研究生姓名周明指导教师姓名李军成专业名称普通外科学研究方向甲乳胰疾病的研究论文提交日期2015年3月苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独:^进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论〕不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得負州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究f出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担4声明的法律责任。论文作者签名;vS1〇苏州大

2、学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和耷质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文南信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电号文档，允许论文被查阅和借阅，可以釆用影印、缩印或其他复制手甚保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关鸯据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在_____年_月解密后适用本规定。非涉密论文口论文作者签名：'纪,日期：&丄'丨々人胰腺癌吉西他滨耐药细胞

3、株中lncRNA表达谱初步筛选及研究中文摘要人胰腺癌吉西他滨耐药细胞株中lncRNA表达谱初步筛选及研究中文摘要目的：利用高通量长链非编码RNA(LongnoncodingRNAs，LncRNAs)芯片检测胰腺癌亲本细胞株SW1990及吉西他滨耐药株SW1990/GZ的lncRNA与mRNA表达谱变化，初步探索吉西他滨对SW1990细胞中lncRNA表达量的影响，并对差异表达的mRNA作进一步的生物学信息分析，从新的角度探索胰腺癌耐药发生的分子机制，从而为逆转胰腺癌癌细胞耐药治疗提供新的靶点。方法：采用体外间歇浓度梯度递增法构建人胰腺癌吉西他滨耐药细胞株SWl990/GZ；光学

4、显微镜下观察两细胞形态；MTT法检测SWl990/GZ相对于其亲本细胞SW1990的耐药性和耐药倍数、绘制生长曲线、计算倍增时间以及流式细胞仪分析SW1990及SWl990/GZ的细胞周期；运用高通量lncRNA芯片(HumanLncRNAMicroarrayV2.0)比较胰腺癌耐药细胞株SWl990/GZ与亲本细胞SW1990之间lncRNA和mRNA表达谱差异；对差异表达的mRNA行生物学信息分析；采用实时荧光定量PCR对差异表达谱中的6个lncRNA（RP11-58D2.1，lincRNA-ZNF532，AP000221.1，CTC-338M12.5，CR619813，D

5、DX6P）和9个mRNA（SYT1，FAM171B，ZNF331，FAM187B，CYP1A1，SRXN1，HIST1H2BL，TOMM40L，SPP1）进行验证；将SW1990培养在含有吉西他滨浓度为1.5µM不同的时间（0,1,2,4,8,16d）及将SW1990培养在不同浓度（0,1,2,4,8,16µM）吉西他滨培养基中24h，采用实时荧光定量PCR检测SW1990细胞株lincRNA-ZNF532、DDX6P的表达量的变化情况。结果：1、成功建立了人胰腺癌吉西他滨耐药细胞株SWl990/GZ，SWl990/GZ与SW1990同源。2、在细胞形态学上，SWl990/GZ

6、较SWl990发生了明显改变；SW1990和SWl990/GZ对吉西他滨的IC50值分别为3.03±0.27µmol/L、230.46±0.31µmol/L,耐药I中文摘要人胰腺癌吉西他滨耐药细胞株中lncRNA表达谱初步筛选及研究指数（RI）达到71.6，两者比较有显著差异（P﹤0.01）。CCK-8法测得SW1990/GZ比SW1990细胞的生长速度变慢，两者的倍增时间分别为32.80±2.12h和22.36±1.78h（P﹤0.05）。与SW1990细胞相比，SW1990/GZ的G1细胞增多（P﹤0.05），G2期细胞减少（P﹤0.05），S期细胞比例无明显差异（P＞0.

7、05）。3、lncRNA芯片结果显示耐药细胞株SW1990/GZ与亲本细胞株的lncRNA和mRNA表达差异显著：lncRNA中，2倍以上表达上调的lncRNA为1993条，2倍以上表达下调的lncRNA为2990条；mRNA中，2倍以上表达上调的mRNA为2671条，2倍以上表达下调的mRNA2088条，GO分析这些mRNA主要新陈代谢过程、细胞周期、分子粘合物、核苷酸结合物、激酶活性、细胞核、细胞质等方面有关联，Pathway分析发现参与Toll-样受体信号传导途径、小细胞肺癌、慢性粒细