休克肠淋巴液对脾树突状细胞免疫功能的影响

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1、授予单位代码10089学号或申请号12007HebeiMedicalUniversity硕士学位论文在职科学学位休克肠淋巴液对脾树突状细胞免疫功能的影响学位申请人：李建锋导师：牛春雨教授赵自刚教授专业：病理学与病理生理学二级学院：河北北方学院2015年3月河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组）的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果,其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医•大学所

2、、>有。否则，承担研究生签名:河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写,文责自负。目录中文摘要………………………………………………………………………1英文摘要………………………………………………………………………3研究论文休克肠淋巴液对脾树突状细胞免疫功能的影响前言……………………………………………………………………6材料与方法……………………………………………………………7结果……………………………………………………

3、………………12附图……………………………………………………………………16讨论……………………………………………………………………22结论……………………………………………………………………25参考文献………………………………………………………………26综述树突状细胞及其调节细胞免疫功能的作用………………………..30致谢…………………………………………………………………………41个人简历……………………………………………………………………42中文摘要休克肠淋巴液对脾树突状细胞免疫功能的影响摘要背景：免疫功能紊乱是重症失血性休克患者出现全身炎症反应综合征（SIRS）、以及随之而来的多

4、器官功能障碍综合征（MODS）、甚至引起死亡的重要原因。机体中一系列的免疫细胞，通过产生大量细胞因子以非特异性方式对抗外来抗原的入侵。其中，树突状细胞（DCs）等抗原递呈细胞可将入侵信息递呈给T淋巴细胞，启动长期特异性免疫机制，从而发挥抗感染的作用。研究表明，失血性休克发展过程中，先天免疫最先受累，并进一步导致免疫功能抑制、促进炎症全身扩散，是发生SIRS、MODS与脓毒症的重要免疫学基础。休克肠淋巴液回流是失血性休克后组织损伤、器官功能障碍的重要发病学基础；已有的研究也发现，阻断休克肠淋巴液回流可降低脾脏、胸腺等免疫器官的结构损伤，改善细胞免疫功能。但休克肠淋巴液回流与DCs这一启动

5、细胞免疫功能的抗原递呈细胞之间的关系，还不清楚。目的：本研究在建立失血性休克小鼠模型的基础上，应用脾DCs免疫磁珠分离技术，观察肠淋巴液引流、肠淋巴液孵育对DCs在脂多糖（LPS）处理前后产生细胞因子能力的影响，初步揭示肠淋巴液对DCs免疫功能的调节作用。方法：健康雄性BALB/C小鼠，分为假手术组、休克组、休克+引流组。休克组与休克+引流组动物复制失血性休克模型（40±2mmHg维持60min后行液体复苏），休克+引流组动物于液体复苏结束即刻行肠淋巴液引流，3h后或假手术组于相应时间点，取脾，应用免疫磁珠法（抗CD11c）分选获取脾脏DCs；离体培养环境状态下，观察三组小鼠脾DCs以

6、及在LPS孵育后产生TNF-α、IL-10、IL-12的能力。取健康雄性BALB/C小鼠，复制失血性休克模型，部分引流低血压60min期间的休克期肠淋巴液（post-hemorrhagicshockmesentericlymphduringhypotenstion，PHSML-H），部分引流液体复苏后肠淋巴液（post-hemorrhagicshcokandmesentericlymphafterresuscitation，PHSML-R），取正常小鼠引流正常肠淋巴液（normalmesentericlymph，NML）；然后取正常小鼠脾脏，应用免1中文摘要疫磁珠法分选获取脾脏DCs；

7、将NML、PHSML-H、PHSML-R分别与正常DCs培养，并以LPS做为阳性对照，同时设空白对照，观察各组DCs在3、6、12、24h以及再次分别与LPS处理后24h产生TNF-α、IL-10、IL-12的能力。结果：急性分离的脾DCs，经免疫磁珠分选、流式细胞术检测，获+得的CD11c细胞纯度均在90%以上。假手术组、休克组和休克+引流组小鼠急性分离的脾DCs，在体外培养24h后，各组间培养上清液中TNFα、IL-10和IL-12含量未见