凋亡诱导因子在慢性氟中毒大鼠脑组织神经细胞凋亡中的作用

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1、中图分类号••R361+.2单位权码：10660UDC：616-02学号：10660S120I89学科专业代码：100104密级：公幵；1V■•.’•）)•、•、...--.f♦’：*7'u^kr'5,'^F,''*^VI<<■*,•贵阳医学院2015届硕士学位论文(科学学位).，凋亡诱导因子在慢性氟中毒大鼠脑组织神经细胞凋亡中的作用Effectoftheapoptosisinducingfactorinneuronalapoptosisofratbrainswithchronicfluorosis^•••*•、.J.:，r«研究生：魏露莎X导师

2、：官志忠教授贵阳医学院学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。除与外单位合作项目将予以明确方式规定外，本研究已发表与未发表成果的知识产权均归属贵阳医学院。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。qA/又年弋月if日年-r月冲日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送

3、交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权贵阳医学院可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于（请在以下相应方框内打“V”）：1、保密□,在_年解密后适用本授权书。2、不保密口。w/T年了月日^_年_^月」^中图分类号：R361+.2单位代码：10660UDC：616-02学号：10660S120180学科专业代码：100104密级：公开贵阳医学院2015届硕士学位论文（科学学位）凋亡诱导因子在慢性氟中毒大鼠脑组织神经细胞凋亡中的作用Effectoft

4、heapoptosisinducingfactorinneuronalapoptosisofratbrainswithchronicfluorosis论文作者：魏露莎指导教师：官志忠教授吴忠琴主任医师申请学位：医学硕士培养单位：贵阳医学院学科专业：病理学与病理生理学研究方向：病理学研究起止日期：2013年9月至2015年5月论文评阅人：盲评答辩委员会主席：郑洪教授论文答辩日期：2015年5月23日二〇一五年三月凋亡诱导因子在慢性氟中毒大鼠脑组织神经细胞凋亡中的作用专业：病理学与病理生理学硕士研究生：魏露莎导师：官志忠教授吴忠琴主任医师【摘要】目的

5、：通过检测慢性氟中毒大鼠脑组织中神经细胞凋亡率、凋亡诱导因子（apoptosis-inducingfactor，AIF）和相关凋亡因子caspase在蛋白表达的水平，了解AIF介导的非caspase依赖性细胞凋亡途径是否参与慢性氟中毒大鼠大脑神经细胞凋亡过程，并探讨其发生机制。方法:实验用SpragueDawley（SD）大鼠60只，雌雄各半,随机分为两组，即正常对照组：自由饮用自来水，饮水中含氟量<0.5mg/L；染氟组：饮水中加入氟化钠，使氟含量为50mg/L。两组均饲以标准饲料（氟含量小于0.5mg/kg），实验期为10个月。实验结束时，观

6、察大鼠氟斑牙发生情况；用氟离子选择电极法测定大鼠尿氟、骨氟含量；HE染色观察大鼠大脑神经组织学改变，尼氏染色观察大鼠脑组织神经细胞内尼氏小体形态学改变；免疫组化检测大脑皮质及海马AIF分布；蛋白印迹（Westernblotting）检测大脑皮质及海马AIF、caspase-3及caspase-9的蛋白表达水平；流式细胞术（flowcytometr，FCM）检测大鼠大脑皮质及海马细胞凋亡率。结果：染氟成年大鼠出现不同程度的氟斑牙，尿氟及骨氟含量明显高于对照组(P<0.05)；HE染色病理形态学检查显示，各组大鼠脑组织未见明显异常改变，尼氏染色发现染

7、氟组大鼠脑组织神经细胞中尼氏体数量较对照组颜色变浅，数量减少；免疫组化结果显示，氟中毒组海马及皮质顶叶神经细胞AIF阳性表达率与染色程度明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），但在额叶和枕叶差异无统计学意义（P＞0.05）；蛋白印迹结果显示，染氟组大鼠脑组织神经细胞线粒体内AIF（57-kDa）的蛋白表达水平明显低于对照组（P＜0.01），而细胞核中AIF的蛋白表达水平明显高于对照组（P＜0.01）；染氟组大鼠脑组织神经细胞含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（cysteinylaspartatespecificproteinase，Casp

8、ase）-3的蛋白表达水平明显高于对照组（P<0.01），caspase-9的蛋白表达水平高于对照组（P<0.05）；流式细胞术结果显示