基于pcr-fret的大肠杆菌快速检测新方法的建立

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3、化ｒｕｉｃｋｄｅｔｅｃｔｉｏｎｑｏｆＥ．ｃｏｌｉ作者姓名；严虜虞学科、专业：无机化学学号：２１２０７２１５指导教师；周棚副教授完成日期：２０１５年６月夫逢巧义夫＃ＤａｌｉａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ大连理工大学学位论文独创性声明：作者郑重声明所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除文中己经注明引用内容和致谢的地方外，本论文不包含其他个人或集体己经发表的研究成果，化不包含其他臣申请学位或其他用途使用过的成果一。与我罔工作

4、的同志对本巧究所做的贡献均己在沦文中做了明确的说明并表示了谢意。若有不实之处，本人愿意承捏相关法律责任。－学位论文题目：基于ＰＣＲＦＲＥＴ的大肠杆菌快速檢测新方法的建立作者签毒：遠日期：如年《月日辞大连理工大学硕±学位论文備要在自然环境中，饮用水水源很容易受到病原微生物的侵染，被污染的水体中，通常能检测出大量的致病菌和肠道病毒。大肠杆菌作为水源中病原菌的标准指示菌，对水质ＧＢ５７４９－２００６生安全监测具有重要意义，我国国标活饮用水玉生标准中严格规定：饮用ＯＯｍＬ。水的大肠抒菌限值为每ｌ不得检出然而，目前大厮

5、巧菌的标准检测方法仍Ｗ传、统检测方法为主，这些检测方法耗时长操作繁琐，不适合对水样进行实时监控。如何快速准确检测出水体中大肠杆菌称为人们研究的热点。本论文围绕大肠杆菌快速检测来展开研巧工作，选取髙特异性、高灵敏度的ＰＣＲ和具有准确定量的ＦＲＥＴ原理来实现对大肠杆菌的捡测。首先建立普通ＰＣ民法。选取大肠杆菌的特异性保守性基因ｕｉｄＡ作为目标检测物，对ｕｉｄＡ进巧引物设计后进行ＰＣ民实验，在保证引物的特异性和准确性后克隆成质粒，并根据质粒对ＰＣＲ扩增的反应体系和反应条件进行筛选和调控，最后得到最佳的ＰＣ氏扩増条件。－Ｃ５基的Ｆ

6、ＲＥＴ检测体系然后建立ＱＤｓｙ。选取反应条件溫和的水相回流法来合成ＣｄＴ一ｅ量子点，通过调节回流时间得到系列发光效率较好的量子点。选取量子产率为５３％、发射在６０２ｎｍ的ＣｄＴｅ量子点为ＦＲＥＴ的供体，根据Ｆ加ｓｔｅｒ原理对比量子点与染料的吸收和发射光谱，选取在６００ｎｍ左右有较强吸收的花菁染料Ｃｙ５作为ＦＲＥＴ的一连接后形成捕获探针和报告探针受体。根据目的ＤＮＡ设计的组适配子，，与供受体对两纽探针可与目的ＤＮＡ特异性结合形成夹必结构并通过ＦＲＥＴ来实现对目的ＤＮＡ的检测。对检测中可能影响的因素进行适当调控后，成功对ＵｉｄＡ基因进

7、行了检测，其检测－１ｌ化范围内有良好的线性关系限为２ｎｍ〇ｙＬ，且在２ｎｍｏｌ／Ｌ００ｎｍｏ，线性系数为０．９９９。－ＦＲＥＴ最后联立ＰＣ民，其可在化内完成对大肠杆菌的检测。对ＵｉｄＡ基因的检测结ｅ一果显示其可检测到ＳＯｃｏｐｉｓ的山ｄＡ，比普通ＰＣ民法的检测限约低个数量级，该方法３７－可检测大肠杆菌浓度在１０１０ＣＦＵ／ｍＬ范围内的水样，最后对实际水样进行了检测，检一ＰＣ艮法一结果相致。测结果与平板法和普通，但准确度还有待进步提高关键词：大肠杆菌：检测：ＰＣＲ；ＦＲＥＴ－－Ｉ基于ＰＣＲ－ＦＲＥＴ的大肠杆菌快速检测新方

8、法的建立ｍｅｎｗ－Ｄｅｖｅｌｏｔｏｆａ