基于流式技术的噬菌体ΦX174快速检测新方法建立

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1、分类号：Q939.48单位代码：10193密级：公开学号：20150417硕士学位论文基于流式技术的噬菌体ΦX174快速检测新方法建立StudyonaNewRapidDetectionMethodforphageΦX174BasedonFlowTechnology作者姓名：刘思章学位类别：理学硕士专业名称：生物技术研究方向：功能基因组学指导教师：张美萍教授所在学院：研究生院二零一八年五月独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在导师指导下，独立进行研究所取得的成果。尽我所知，除文中特别加以标注和致谢所列内容外，论文中不包含其他个人或

2、集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本学位论文所有内容若有不实之处，本人愿意承担一切相关法律责任和后果。学位论文作者签名：签字日期：年月日关于学位论文使用授权的声明1、本人完全了解吉林农业大学有关保留和使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间所完成的论文及相关成果的知识产权属吉林农业大学所有，并同意将本论文的版权授权给吉林农业大学，学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可

3、以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。2、本人（同意/不同意，务必打印后填写）吉林农业大学将本论文版权授权给不同媒体进行电子出版、多媒体出版、网络出版以及其他形式出版（涉密学位论文解密后应遵守此协议）。3、本人声明毕业后若发表在攻读研究生学位期间完成的论文及相关的学术成果，必须以吉林农业大学作为第一署名单位。学位论文作者签名：签字日期：年月日指导教师签名：签字日期：年月日摘要近些年来，我国政府不断加大生物产业的科技投入，特别是针对自2003年以来爆发的SARS、甲型流感、埃博拉等高致病性病毒的研究工作。科研人员在实验操作中容

4、易接触到可以传染疾病的生物材料，这些生物材料会对实验人员的生命和健康造成严重危害。关于生物安全评价的检测和研究工作越来越受到重视，同时人员防护装备性能及其评价也显得尤为重要。因此积极深入开展针对模式病毒测量新方法研究，同时制定更严格的计量标准，以此提高人员防护装置性能评价的准确性，为监测环境中病原微生物提供计量支撑。本研究以模式病毒噬菌体ΦX174为研究对象，制备了噬菌体ΦX174标准物质，克隆噬菌体ΦX174gpG和gpH蛋白基因并构建表达载体，制备抗gpG和gpH蛋白的单克隆抗体。利用流式细胞仪进行检测，建立了基于流式技术检测噬菌体Φ

5、X174的方法。具体实验成果如下：1.利用冻干技术，制备出噬菌体ΦX174饼状标准物质。制备出的噬菌体ΦX174标准物质具有良好的均匀性和稳定性，可以稳定保存四个月。2.成功克隆gpG和gpH基因，并构建表达载体，诱导表达重组蛋白gpG和gpH。3.以纯化的gpG和gpH蛋白为抗原，制备抗gpG和gpH蛋白的单克隆抗体。获得了10株能够稳定分泌抗gpG和gpH的杂交瘤细胞株。4.本研究首次建立针对病毒核酸、蛋白质外壳特异性双重荧光标记方法，该方法可以保证检测到的病毒是具有侵染能力的活病毒。5.通过优化流式细胞仪系统参数、噬菌体ΦX174荧

6、光标记方法，建立流式细胞仪2检测噬菌体ΦX174的方法。流式测量结果呈线性关，R=0.9998。流式检测方法与空斑2计数法之间具有良好的线性关系，R=0.9985。本研究所建立的流式检测方法重复性较高，方法稳定性好。6.改进病毒计数仪标记方法，建立病毒计数仪检测噬菌体ΦX174的方法。毒计数2仪3100检测结果呈线性关系，R=0.998。病毒计数仪3100与空斑计数法之间具有良好2的线性关系，R=0.9904。本研究所建立的病毒计数仪3100方法重复性较高，方法稳定性好。I7.通过优化量化成像分析流式细胞仪系统参数，建立流式显微成像仪检测

7、噬菌体ΦX2174的方法。量化成像分析流式细胞仪检测结果呈线性关系，R=0.988。量化成像分析流2式细胞仪检测方法与空斑计数法之间具有良好的线性关系，R=0.992。本研究所建立的流式显微成像仪检测方法重复性较高，方法稳定性好。8.本研究所建立的三种流式检测方法相比于空斑计数法具有检测时间短，准确性高，重复性好等优点，为其他致病性病毒的检测提供技术支持。关键词：噬菌体ΦX174、计量学、流式检测技术、病毒荧光标记、标准物质IIAbstractInrecentyears,thegovernmentofourcountryhasbeenco

8、nstantlyincreasingtheinvestmentofscienceandtechnologyinthebiologicalindustry,especiallyintherese