慢病毒介导的angiomotin过表达对骨转移前列腺癌细胞迁移的作用及机制研究

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1、分类号：R737学校代码：10062密级：学号：2012602042硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：慢病毒介导的Angiomotin过表达对骨转移前列腺癌细胞迁移的作用及机制研究TITLEEffectsandmechanismsofover-expressionofangiomotinbylentivirusonbone-metastaticprostatecancercells一级学科：基础医学二级学科：病原生物学论文作者：季擎天指导教师：李晓霞教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R7

2、37学校代码：10062密级：学号：2012602042学位类别：科学学位专业学位学科门类：医学硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：慢病毒介导的Angiomotin过表达对骨转移前列腺癌细胞迁移的作用及机制研究TITLEEffectsandmechanismsofover-expressionofangiomotinbylentivirusonbone-metastaticprostatecancercells一级学科：基础医学二级学科：病原生物学论文作者：季擎天指导教师：李晓霞教授天津医科大学研

3、究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借

4、阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日中文摘要目的：研究细胞迁移相关蛋白Angiomotin(Amot)在骨转移前列腺癌细胞PC3-mm2迁移中的作用及相关机制，为PCa骨转移的防治提供研究基础。方法：1．利用慢病毒感染包装技术构建Amot稳定过表达细胞PC3mm2-Amot和阴性对照细胞PC3mm2-CDH；利用细胞划痕实验及Transwell细胞迁移实验检测PC3mm2-A

5、mot细胞的迁移能力；2．利用qRT-PCR技术检测PC3mm2-Amot中骨转移相关基因mRNA的表达变化；构建质粒pIRES2-Amot，同时以pIRES2-EFGP为阴性对照，分别瞬时转染PC3细胞中过表达Amot，Westernblotting检测β-catenin的核内表达。将质粒pIRES2-Amot和pcDNA-β-catenin瞬时转染PC3细胞中分别过表达Amot和β-catenin，利用免疫共沉淀技术（anti-Cad11抗体免疫共沉淀）分别检测免疫复合物中Amot与β-catenin的表达；利用免疫共沉淀

6、技术（anti-Amot抗体免疫共沉淀）检测PC3mm2-Amot细胞中Patj与Amot的结合情况。结果：1．成功构建了Amot稳定过表达细胞株PC3mm2-Amot。细胞划痕实验结果显示，PC3mm2-Amot细胞在5h和10h内的细胞迁移能力较对照细胞PC3mm2-CDH明显增强（P<0.05），划痕愈合率分别为10.2%±0.6%和19.0%±0.8%。Transwell细胞迁移实验结果显示当transwell下室为10%FBS的培养基时，实验组平均每高倍视野（×200）迁移出膜细胞数为对照组的3.62倍，迁移促进率为

7、263.6%（P<0.05）。当transwell下室为成骨细胞条件培养基时，实验组平均每高倍视野（×200）迁移出膜细胞数为对照组的2.46倍，迁移促进率为146.2%（P<0.05）。当transwell下室为成骨细胞共培养时，实验组平均每高倍视野（×200）迁移出膜细胞数为对照组的1.98倍，迁移促进率为97.96%（P<0.05）。2．qRT-PCR结果表明，与PC3mm2-CDH细胞相比，PC3mm2-Amot细胞中骨转移相关基因COX-2、C3上调最为显著，而CXCR4、MCP-1、IL-6、PTHrp无明显改变；

8、Westernblotting结果表明Amot在PC3细胞中的过表达导致β-catenin的核内表达增强；anti-Cad11抗体免疫共沉淀结果显示，在PC3细胞中分别过表达Amot或β-catenin，均会导致β-catenin或Amot与Cad11结合的下降，即pIRES