抗人fcεriα fab-聚合物胶束-雷公藤红素诱导肥大细胞凋亡治疗过敏性疾病

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1、上海交通大学医学院博士学位论文抗人FcεRIαFab-聚合物胶束-雷公藤红素诱导肥大细胞凋亡治疗过敏性疾病培养单位：上海市第一人民医院作者姓名：彭霞指导教师：李莉学号：0127249283专业：临床检验诊断学研究方向：肥大细胞及变态反应性疾病申请学位级别：博士关键词：雷公藤红素，聚合物胶束，抗人FcεRIα单抗Fab片段，肥大细胞，凋亡，过敏性疾病【基金项目】国家自然科学基金资助项目（NO.81471593，81273276，81072448）；上海市科委长三角科技联合攻关项目（NO.10495810200）；上海市科委引导类项目（N0.14411963200）；上

2、海申康医院发展中心临床辅助科室能力建设项目（NO.SHDC22014005）；上海市科委创新行动计划（NO.11JC1410300）；上海市自然科学青年基金（NO.12ZR1447800）ShanghaiJiaoTongUniversitySchoolofMedicineForthedegreeofDoctorofClinicalLaboratoryDiagnosticsTargetingMastCellswithAnti-FcεRIαantibodyFabFragment-ConjugatedCelastrol-LoadedPolymericMicellesInh

3、ibitedAllergicDiseasesPresentedbyXiaPengAcceptedontherecommendationofProf.LiLiShanghaiJiaotongUniversityAffiliatedFirstPeople'sHospitalKeywords:Celastrol;Polymericmicelles;Anti-FcεRIαmonoantibodyFabfragment;Mastcell;Apoptosis;AllergicdiseasesFund:NationalNaturalScienceFoundation(NO.814

4、71593，81273276，81072448);ScienceandTechnologyCommissionofShanghaiYangtzeRiverDeltaTechnologyjointresearchproject(NO.10495810200);GuideProjectofShanghaiScienceandTechnologyCommission(N0.14411963200);ShanghaiScienceandTechnologyInnovationActionPlan(NO.11JC1410300);ClinicalAuxiliaryDepart

5、mentsAbilityConstructionProjectofShanghaiShen-KangHospitalDevelopmentCenter(NO.SHDC22014005);TheShanghaiyouthsciencefund(NO.12ZR1447800)上海交通大学博士学位论文上海交通大学博士学位论文抗人FcεRIαFab-聚合物胶束-雷公藤红素诱导肥大细胞凋亡治疗过敏性疾病摘要研究目的：构建偶联抗人FcεRIαFab包裹雷公藤红素的聚合物胶束（抗人FcεRIαFab-聚合物胶束-雷公藤红素三聚物），分析其对肥大细胞的靶向性、增殖抑制及促凋亡作用，

6、探讨其在过敏性哮喘小鼠体内的分布及对哮喘和被动皮肤过敏反应的抑制效果。研究方法：①采用薄膜水化法制备雷公藤红素-聚合物胶束，EDC偶联法构建抗人FcεRIαFab-聚合物胶束-雷公藤红素三聚物，采用粒度分析仪、透射电子显微镜分别观察胶束的粒径和形态，反相-高效液相色谱法测定其包封率和载药量。②体外以人外周血嗜碱性白血病细胞KU812（表面高表达FcεRI，靶细胞）和人未成熟肥大细胞HMC-1（表面几乎不表达FcεRI，非靶细胞）为研究对象，以香豆素6为探针，采用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测三聚物的靶向作用；CCK-8法测定细胞增殖抑制率，AnnexinV-FIT

7、C/PI双标记合并流式细胞仪定量分析凋亡细胞比率，酶法和免疫印迹分别检测凋亡分子caspase3活性和切割的PARP表达水平，分析三聚物对肥大细胞增殖抑制及凋亡作用。③以卵清蛋白免疫上海交通大学博士学位论文BABL/c小鼠建立哮喘模型，以近红外荧光素DiR为探针，观察三聚物在过敏性哮喘小鼠体内的分布及其对肺组织的靶向性；给予三聚物干预治疗，ELISA法检测血清OVA特异性IgE（OVA-sIgE）和肺泡灌洗液（BALF）组胺的水平，采用Luminex技术测定BALF中Th1/Th2细胞因子的含量，计数BALF白细胞总数及嗜酸性粒细胞数，观察肺组织炎症情况，分析三