火棘果活性成分分析制备及其制剂基质研究

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1、分类号学号D200777392学校代码10487密级博士学位论文火棘果活性成分分析制备及其制剂基质研究学位申请人：鄢又玉学科专业：生物制药工程指导教师：余龙江教授赵春芳副教授答辩日期：2016年1月17日AThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofDoctorofEngineeringResearchonAnalysisandPreparationofActiveIngredientsfromPyracanthaFruitanditspharmaceuticalmatri

2、xPh.D.Candidate:YouyuYanMajor:BiopharmaceuticalEngineeringSupervisor:Prof.LongjiangYuAssociateProf.ChunfangZhaoHuazhongUniversityofScienceandTechnologyWuhan,Hubei430074,P.R.ChinaJan,2016独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究

3、做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日华中科技大学博士

4、学位论文摘要火棘[Pyracanthafortuneana(Maxim.)Li]为蔷薇科（Rosaceae）苹果亚科（Maloideae）火棘属（PyracanthaRoem.）常绿野生灌木，史载及现代研究表明，火棘果具有健脾消积、降血脂、抗氧化及美白等功效，但目前国内外对火棘果功效及其物质基础尚缺乏系统研究。本文在建立火棘果主要活性成分含量检测方法的基础上，优化了火棘果皮肉及果籽中有效成分的同步提取制备工艺，同时建立了基于DPPH总抗氧化能力评价为导向的鲜果制备高抗氧化活性提取物的工艺，并进一步建立了火棘果总黄酮、多糖的分离纯化制备工艺，在进行抗肿瘤活性初筛

5、基础上，重点研究了火棘果总黄酮体外抗肿瘤活性及其可能机制。此外，还针对火棘果产品开发的凝胶制剂基质中各成分相互作用进行了研究。主要取得了如下研究结果：（1）建立了火棘果主要活性成分含量的分析方法。采用香草醛-盐酸法测定火棘果总原花青素含量、AlCl3比色法测定总黄酮以及HPLC法检测多种黄酮含量；采用响应面法优化改良硫酸-苯酚法及福林酚法分别检测火棘果多糖与总酚含量。同时，建立了DPPH法体外抗氧化评价体系并显著提高了该方法的稳定性。（2）分别建立并优化了基于火棘果果皮肉、果籽和整果的主要功效物质的提取工艺。以果皮肉为原料，分别采用常规水提法、复合酶解预处理+

6、乙醇回流提取、硫酸-乙醇法依次提取多糖、总黄酮及不可萃取多酚，经响应面法优化提取工艺，火棘果多糖、总黄酮及不可萃取多酚的得率分别为12.87%，0.91%及16.73%；以果籽为原料，利用正己烷、硫酸-乙醇为溶剂依次提取籽油及不可萃取多酚，在优化条件下，籽油及不可萃取多酚的得率分别为10.24%及7.08%；以整果为原料，以DPPH总抗氧化能力为提取导向指标，优化了提取工艺并得到抗氧化活性高的提取物。（3）采用HPD-100C型大孔树脂纯化火棘果总黄酮，优化了的纯化工艺使火棘果总黄酮纯化后含量上升为原来的2.3倍，回收率高达88.9%；对火棘果多糖进行了分级醇

7、沉，并比较了其抗氧化活性，发现乙醇浓度由低到高逐级醇沉时，50%（V/V）乙醇醇沉得到的多糖量最多，而70%（V/V）乙醇醇沉得到的多糖抗氧化活性最强。I华中科技大学博士学位论文（4）利用体外细胞培养体系，在对上述分离纯化的火棘果主要活性物质的抗肿瘤初筛基础上，研究了火棘果类黄酮提取物的体外抗肿瘤活性。结果表明，类黄酮提取物能有效抑制小鼠B16黑色素细胞、人肝癌细胞HepG2及人宫颈癌细胞Hela的增殖，且对抑制细胞增殖具有时间-剂量依赖性。进一步研究了火棘果类黄酮提取物诱导HepG2细胞的凋亡作用，发现当火棘果类黄酮提取物浓度低于1600μg/mL时，诱导H

8、epG2细胞的早期凋亡率和总凋亡率随剂