广西猪星状病毒分子流行病学调査及基因型分析

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1、＇ｉ专Ａ学化巧古单位化义广西猪星状病毒分子流行病学调査及基因型分析李助杰．’．中＾、＇Ｖ．．记＇．：Ｉ－：？：＇■，－．、，－？．．－＇，．．巧廣＞Ａ＃二〇—五年六月分类号Ｓ３祐密级的ＵＤＣｎｓ专业学位硕丈学位论文广西猪星状病毒分子流行病学调査及基因型分析李励杰专业学位名称兽医硕±指导教师黄伟坚教授论文答巧日巧从５巧４岛学位巧予日巧６巧》？良年答辩委员会主席诞斧、私楚广西大学学位论义原幼性和使用授权声明本人声明所呈交的论文，

2、是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除已特别加标注和致谢的地方外，论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的研究成果，也不包含本人或他人为获得广西大学或其它单位的学位而使用过的材料一。与我同工作的同事对本论文的研究工作所做的贡献均已在论文中作了明确说明。本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品，知识产权归属广西大学。本人授权广西大学拥有学位论文的部分使用权，即：学校有权保存并向国家有关部口或机构送交学位论文的复印件和电子版，可将学位论文的全部或部分内容编，允许论文被查阅和借阅入有关数据库进行检索和传播

3、，可采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。本学位论文属于：□保密，在年解密后适用授权。不保密。＂＂（请在上相应方框内巧Ｖ）论文作者签名：日期：日期？指导教师签名：書‘。Ｌ飞作者联系电话：电子邮箱；广西猪星状病毒分子流行病学调查及基因型分析摘要一星状病毒（Ａｓｔｒｏｖｉｍｓ，ＡｓｔＶ）是种可感染哺乳动物及鸟类的人畜共患病病原，与多种动物的腹泻疾病相关。星状病毒具有基因多型性与变异性，可Ｗ发生基因重组，使其具有不俗的适应宿主能力和跨种间传播能为，其潜在的人畜共患风险需引起我们的关注。本研

4、究通过ＲＴ－ＰＣ民方法对猪星状病毒在广西地区的流行情况进行了调查；并利用ＲＡＣＥ方法对部分阳性样品的衣壳蛋白基因（ＯＲＦ２）进一行扩增，为了解广西猪星状病毒的流行状况和遗传进化规律提供了定的科学参考。本研究针对猪星状病毒部分ＯＲＦ化与部分０ＲＦ２基因设计两种不同的引物－，通过ＲＴＰＣ民方法对广西９个地市２８个不同猪场的４６０份猪粪便样品进行检测，结果显示猪星状病毒猪场阳性率为１００％？（巧／２９）样品阳性率为６４．８％２９８／４６００３０日龄猪群感染率；（）；最局，为７８．７％（１００／１２７）。调查结果显不，猪星状病毒在猪

5、群中存在普遍的感染。对克隆的４９株猪星状病毒部分ＯＲＦ化ＵＯＯｂｐ）经进行遗传进化分析，结果显示猪星状病毒可分为４个基因型伴ＡｓｔＶ２，ＰＡｓｔＶ３ＰＡｓｔＶ４ＰＡｓｔＶ５，其中４０株属于ＰＡｓｔＶ２型，同型毒株间核昔，，）Ｉ？．１１００％ｓｔＶ４型酸同源性为７４％２株属于ＰＡ，同型毒株间核巧酸同；源性为８９．６％；６株属于ＰＡｓｔＶ５型，同型毒株间核昔酸同源性为？９３．７％１００％；此外还克隆得到ＰＡｓｔＶ３型１株。克隆得到的１２株猪？星状病毒部分ＯＲＦ２（１８３ｂｐ）均为ＰＡｓｔＶｌ型，核昔酸同源性为８６．９％１０

6、０％。所得的克隆毒株中，（＾ＰＡｓｔＶ２型毒株居多，说明相对于其它ｔ基因型的猪星状病毒，ＰＡｓＶ２型在广西地区存在较大规模的流行。＜本研究参考克隆所得ＯＲＰ化３端保守序列，设计上游引物２对，运用ｙＲＡＣＥ－ＰＣＲ的方法对猪星状病毒的ＯＲＦ２衣壳蛋白基因进行部分和全长扩增，得到２株衣壳蛋白基因序列，其中包含：１株ＰＡｓｔＶ２型的完整衣壳蛋白基因编码序列－ＧＸＢＳ２ＯＲＦ２，命名为ＰＡｓｔＶ２，其全长为２３５８咕，编码７６２个氨基酸１株ＰＡｓｔＶ２型部分ＯＲＦ２序列，；ｔ－ＧＸＮＮ８６命名为ＰＡｓＶ２，其部分ＯＲＦ２长度为２０２５ｂ

7、ｐ，编码６＾个氨基酸；基于全长ＯＲＦ２基因遗传进化分析表明，两株病毒均与ＭＡ一ｓｔＶ３２型星状病毒处于同分支；两个分离株都含有ＯＲＦ化与＞ＯＲＦ２连接处的高度保守序列和启动子，Ｗ及基因姐３端的茎环结构序列．对其衣壳蛋白抗原性预测分析发现，两个分离株推导编码的？氨基酸序列中，存在明显的保守区和变异区，分别为ｌａａ４１７ａａ和＇＇？４２０ａａ７６２ａａ，并在其衣壳蛋白的３端和５端存在２个抗原指数较高的区域。本研究不仅丰富了猪星状病毒流行病学和生物信息学资料，并为建立不同型猪星状的检测方法打下了坚实的基础。关键词：猪星状病毒分子

8、流行病学调查遗传进化分析ＩＩＭ