血管性血友病因子与脑梗塞形成的相关性分析研究

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1、SOOCHOWUNIVERSITY/、论文论文题目血管性血友病因子与脑梗塞形成的相关性分析研究研究生姓名乐指导教师姓名赵益明专业名称临床检验诊断学研究方向血液学（血栓与止血）论文提交日期2015年3月苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研宄工作所取得的成果^除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料„对本文的研宄作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：舰、日期=苏州大学学位论文使用授

2、权声明本人完全/解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以釆用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在年—月解密后适用本规定。非涉密论文0'曰r2>2论文作者签名>V/：血管性血友病因子与脑梗塞形成的相关性分析研究中文摘要血

3、管性血友病因子与脑梗塞形成的相关性分析研究中文摘要研究背景：脑血管疾病(cerebrovasculardisease,CVD)是世界范围内成人致残的首要因素和第三位人口死亡的病因，也是老年人认知功能障碍和情感障碍的重要原因之一。由中国疾病预防控制中心2012年发布的国家卫生统计数据指出，我国为CVD的高发国家，CVD的发病率由2003年的6.6‰上升到2008年的9.7‰，2011年CVD的城镇人口死亡率为138.68/10万，是我国人口死亡的第二位原因。脑卒中（stroke）是指急性起病、迅速出现局限性或弥漫性脑功能缺失征象的脑血管性临床事件。脑梗塞（cerebralinfa

4、rction,CI）又称缺血性脑卒中（cerebralischemicstroke,CIS）是由于脑部血液供应障碍，缺血、缺氧引起的局限性脑组织的缺血性坏死或脑软化，约占全部脑卒中的80%。血管内皮损伤，导致血小板和炎性细胞在内皮损伤部粘附、聚集，最终形成血栓是脑梗塞发生的主要原因。血管性血友病因子（vonWillebrandfactor,VWF）是一种大分子量的具有粘附功能的多聚体糖蛋白，其在止血与血栓过程中发挥着重要的作用。当血管壁受损时，VWF作为血小板膜糖蛋白（glycoprotein,GP）Ib与受损内皮细胞上的胶原之间的桥梁，可以介导血小板粘附到血管壁上。近年来，越

5、来越多的研究证明高水平的VWF和低水平的血管性血友病因子裂解蛋白酶（ADAMTS13）与缺血性脑卒中的发生发展有关，而且VWF介导的新型血小板粘附和激活的拮抗剂，作为一种更强大、安全的抵抗血栓形成紊乱的药物，也受到越来越多的关注。我室曾研制了一套操作简单、特异性强、敏感性高的ELISA试剂盒用于检测血浆中的VWF抗原含量(VWF:Ag)、VWF瑞斯托霉素辅因子活性(VWF:Rcof)及VWF胶原结合能力(VWF:CB)。本研究使用这些ELISA试剂盒检测脑梗塞患者血浆中的上述指标，并结合ADAMTS13活性(ADAMTS13)检测、VWF多聚体电泳分析，为中国人群中的脑梗塞患者

6、的分子病理机制研究提供更可靠的依据。I中文摘要血管性血友病因子与脑梗塞形成的相关性分析研究目的：本研究旨在通过制备重组血小板糖膜蛋白Ibα-Fc融合蛋白(包含IgGFc段，rfGPIbα-Fc)，并检测脑梗塞患者和正常对照组血浆中的VWF:Ag、VWF:Rcof、VWF:CB和ADAMTS13，分析这些指标之间的比值VWF:Rcof/VWF:Ag,VWF:CB/VWF:Ag,ADAMTS13/VWF:Ag,ADAMTS13/VWF:Rcof,ADAMTS13/VWF:CB,并结合VWF多聚体电泳分析，进一步了解VWF及ADAMTS13在脑梗塞的发生发展中的作用。方法：（1）用C

7、HO细胞培养表达rfGPIbα-Fc蛋白，用亲和层析柱纯化rfGPIbα-Fc，并用ELISA、10%SDS-PAGE电泳、Wersternblot方法检测其纯度和免疫学活性。（2）收集苏州大学附属第一医院神经内科住院的94例脑梗塞患者血浆作为病例组和103例正常志愿者的血浆作为对照组。（3）采用ELISA方法检测VWF:Ag、VWF:Rcof、VWF:CB水平，用荧光标记VWF73底物荧光共振能量转移试验（FRETS-VWF73）检测ADAMTS13活性。（4）应用SPSS20.0和Med