杉木nac基因的克隆、表达和snp分析

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1、應纖密级不保密ＵＤＣ６３０硕±学位论文杉木ｉＶＡＣ基因的克隆、表达和ＳＮＰ分析作者姓名；刘琼瑶捲导教师：黄华宏教授学科专业名称：林木遗传育种研究方向；林业化物技术所在学院：林业与生物技术学院Ｓ论嫌交日期；２０＂年６月浙江农林大学．２０１５年６月Ｊ＿Ｉ独创性声明本人帝明，所呈交的学位论文，是在指导教师指导下，通过我的努力取得的成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已经作了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或採写过的研巧成果，也不包

2、含在浙江农林大学或其他教育机构获得学位或证书而使用过的一同对本研巧做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意材料。与我。如被査有严重侵犯他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。学位论文作者亲笔签名：砸游日期；如诚（則日论文使用授权的说明本人完全了解浙江农林大学有关保留、使用学位论文的规定，即学校有权送交论文的复印件，允许论文被査阅和借阅（，可１；学校可＾公布论文的全部或部分内容１＾采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。保密，在年后解密可适用本授权书。□＿＿不保密，本学位论文属于不保密。面

3、＂＂（请在方框内打Ｖ）一‘為乂＞鮮学位论文作者亲笔签名：龄瑪日期：占弓？司《指导教师亲筆签名：苗容Ｈ期：些［Ｊ９車ｌ：凶巧ZhejiangA&FUniversityDissertationfortheDegreeofMasterIsolation,ExpressionandSingleNucleotidePolymorphismsAnalysisOfNACgenesinChinesefir(Cunninghamialanceolata)Candidate:LIUQiong-yaoAdviser:HUANGHua-hong,pr

4、ofessorSpeciality:GeneticsandBreedingofForestTreesDateofSubmission:June,2015ZhejiangA&FuniversityLin’an,zhejiangprovince,P.R.ChinaJune,2015摘要杉木（Cunninghamialanceolata(Lamb.)Hook）是我国南方一种重要的速生材用树种，用途广泛。材质改良是杉木育种的重要内容之一，缩短选择周期，加快遗传改良进程是需要解决的主要难题，而该问题的解决有赖于对其木材材质性状遗传基础的了解和掌握。近年

5、来，许多NAC基因被证明与植物次生细胞壁合成有关。本论文主要开展杉木NAC基因的克隆、表达特异性、遗传转化，以及单核苷酸多态性研究，主要结果如下：利用转录组测序获得的相关数据，克隆了8个具有完整开放阅读框的杉木NAC基因的cDNA序列，分别命名为ClNAC1~ClNAC8，序列长度在1060~1597bp之间。推测出它们所编码的蛋白序列由285~377个氨基酸残基构成，在N端都含有一个128~143个氨基酸残基组成的NAC结构域。系统进化树结果分析表明，ClNAC1、ClNAC6与拟南芥中的SND2/3具有较高同源性，ClNAC8与拟南芥NS

6、Ts和杨树中的PtrWNDs等具有较高同源性。其它5个ClNACs与拟南芥的ATAF1/2、NAC055、NAC072等基因聚在一个分支。利用荧光定量PCR研究8个ClNACs在杉木10个不同器官和组织中的表达特性，发现ClNAC1和ClNAC6在不同组织和器官的表达规律相似，在木质化茎中相对表达量较高，而且主要在木质化茎的木质部中优势表达；ClNAC2和ClNAC3在根中的表达量显著高于其他器官和组织；ClNAC4、ClNAC7均是在雄球花中的表达量最高，其次是根中的表达量，在其他器官和组织中则较低；ClNAC5在一年生叶片中表达量最高，在

7、茎中的表达量最低；ClNAC8在雄球花和雌球花中的表达量最高，在木质化茎中的表达量是非木质化茎中表达量的2倍，在三年生枝条木质部中的表达量是皮中表达量的7倍左右。结合ClNACs基因生物信息学分析推测，ClNAC1、ClNAC6和ClNAC8与次生细胞壁合成有关。选择ClNAC8构建了超表达载体对烟草进行异源转化，获得T0代转基因烟草阳性植株6株，通过表型观测发现转基因烟草叶片相对于对照组烟草较小，叶片质感稍厚实，叶缘褶皱多，推测ClNAC8的超表达对烟草的生长造成了一定影响。通过MEGA4和DnaSP5.0对来自6个群体的40个基因型个体的

8、ClNAC8基因序列进行SNP的检测，共挖掘到187个SNPs，SNP频率为1/13bp，多样性水平达到I0.01368。外显子中存在29个错义突变，38个同义突变