牙龈卟啉单胞菌脂多糖对破骨细胞epha2表达的调控

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1、中文摘要牙龈卟啉单胞菌脂多糖对破骨细胞EphA2表达的调控背景牙周炎是以牙周结缔组织破坏和牙槽骨吸收为特点的慢性炎症性疾病，牙菌斑生物膜中的牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonasgingivalis，Pg）是牙周病变区主要的优势菌之一，该菌能够产生大量的毒力因子，如内毒素、胰酶样蛋白酶等，这些毒力因子是引起牙周结缔组织的破坏和牙槽骨的吸收的重要因素，其中内毒素也称脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）是革兰氏阴性细菌细胞壁成分,是引发牙槽骨吸收的关键因子，它的作用是双方面的，一方面它可以通过促进破骨细胞的分化促进骨吸收，同时还可以抑制成骨细胞的分化而抑制骨形成。骨重建（bo

2、neremodeling）是一种有序、耦联（coupling）的骨吸收和骨形成过程，两者间处于动态平衡以维持骨组织内环境的稳态（homeostasis），且伴随终生。近来研究表明，ephrin/Eph双向信号转导通路参与调节骨代谢平衡，对维持骨稳态起重要作用，而其中的ephrinA2/EphA2信号在骨重建的骨吸收阶段发挥显著作用，而EphA2信号分子是否参与Pg-LPS介导的炎症性骨吸收，目前国内外尚未见研究报道。基于以上背景研究，我们提出了假设，Pg-LPS是否通过EphA2/ephrinA2双向信号通路参与牙槽骨吸收呢？因此本实验通过用Pg-LPS与小鼠单核巨噬细胞RAW264.7共培养

3、，观察EphA2表达的变化，以探讨EphA2信号分子在Pg-LPS介导的炎症性吸收过程中的作用。方法：使用浓度为10g/ml的Pg-LPS与RAW264.7细胞共培养，分别在1、3、5d三个时间点，采用RT-PCR和Westonblotting技术分别检测EphA2基因和破骨相关基因的表达及EphA2蛋白质的表达，并通过TRAP染色检测破骨细胞的分化成熟情况。结果：1.RT-PCR结果显示：在Pg-LPS与RAW264.7细胞共培养0.5h、1h、2h三个时间点，实验组EphA2基因的表达比对照组明显增高。2.RT-PCR结果显示：在Pg-LPS与RAW264.7细胞共培养后，EphA2基因

4、的表达在3d和5d时，实验组较对照组均有明显增加（P<0.01），其中3d组较5d组，EphA2基因的表达更为明显。但在1d时两组间EphA2基因表达无显著性差异。伴随着EphA2基因上调的同时，同时破骨相关基因c-fos、NFATc1、CtsK、ACP5、MMP9的表达都明显升高（P<0.05），但是CtsK在1d时和c-fos在5d时的表达无明显差异。3.Westonblotting结果显示：在Pg-LPS与RAW264.7细胞共培养后，在1d时实验组较对照组EphA2的表达明显增加，但是在3、5d两个时间点EphA2的表达无明显差异。4.TRAP染色结果显示：在Pg-LPS与RAW264

5、.7细胞共培养5d后,实验组较对照组的TRAP阳性多核细胞（细胞核≥3）数目明显增多。结论：1.在无破骨诱导的条件下，Pg-LPS能够促进RAW264.7细胞表达EphA2基因。2.在破骨诱导条件下，Pg-LPS在中期和晚期能够促进RAW264.7细胞向破骨细胞分化，但是在早期促进作用不明显。3.Pg-LPS可能通过EphA2/ephrinA2信号通路参与调节RAW264.7细胞向破骨细胞分化的过程。关键词：Pg-LPS，破骨细胞，EphA2AbstractEffectofPorphyromonasgingivalisLipopolysaccharideontheExpressionofEph

6、A2inRAW264．7CellBackground:Chronicperiodontitisisachronicinflammatorydisease,whichischaracterizedbythedestructionofperiodontalconnectivetissueandalveolarboneloss.Pgindentalplaquebiofilmisoneofthemajorperiodontalpathogenicbacteria.Pgproduceslargeamountsofvirulencefactors,suchasbacterialendotoxin,tryp

7、sin-likeprotease.Theendotoxin,alsocalledlipopolysaccharide(LPS),isacellwallcomponentinGram-negativebacteria,isakeyfactorcausedbytheresorptionofalveolarbone.Itcancauseboneresorptionbypromotingthediffer