b群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白nmb0315核酸疫苗的免疫活性和免疫保护作用研究

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4、答辩委员会主席：让蔚清，教授；万艳平，教授，硕导，南华大学医学院委员１委员２：张艳，教授，硕导，南単大学居学院委员３：伍和平，副教授，南华大学医学院委员４：邓仲良，副教授，硕导，南华大学公共卫生学院答辩日期：２０１５年５月２４日南华大学学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本

5、研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担作者签名：也＾年ｆ月心日南华大学学位论文版权使用授权书本学位论文是本人在南华大学攻读硕±学位期间在导师指导下完成的学位论。文本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研究内容不得其它单位的名义发。表本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，目Ｐ；学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅，；学校可Ｗ公布学位论文的全部或部分内容可采用复印、缩印或其它手段保留学位论文；学校可根据国家或湖南省有关部口规定送交学位论文。同意学校将论文

6、加入《中国优秀博硕±学位论文全文数据库》，并按《中国优秀博硕±学位论文全文数据库出版章程》规定享受相关权益。同意授权中国科学信息技术研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公。众提供信息服务对于涉密的学位论文，解密后适用该授权。作者签名气批从年ｒ月曰心导师签名：吃年广月７日B群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NMB0315核酸疫苗的免疫活性和免疫保护作用研究摘要：[目的]构建B群脑膜炎奈瑟菌pcDNA3.1(+)/NMB0315真核表达重组载体，免疫雌性BALB/c小鼠，检测其诱导小鼠产生的特异性体液免疫和细胞

7、免疫应答水平、免疫血清体外杀菌效果及免疫保护作用，初步探讨pcDNA3.1(+)/NMB0315核酸疫苗的免疫活性和免疫保护效果，为研制一种新的预防B群流脑的核酸疫苗提供可靠的实验依据。[方法]以B群脑膜炎奈瑟菌标准株MC58基因组DNA为模板，PCR扩增NMB0315基因，克隆至pcDNA3.1(+)载体中，经BamHI和XhoI双酶切及测序鉴定重组载体。将构建好的pcDNA3.1(+)/NMB0315重组载体经脂质体转染COS-7细胞和RAW264.7细胞，采用免疫组织化学和Westernblot法检测重组蛋白在真核细胞中的表达，RT-qPCR法

8、检测NMB0315基因mRNA的相对表达水平。大量提取重组质粒，肌肉或腹腔皮下注射法免疫雌性BALB/c小鼠