食源性致病菌检验标准操作程序

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1、食源性致病菌检验标准操作程序福建省疾病预防控制中心二〇一二年十一月2一、生物样本检验标准操作程序（一）粪便样本的保存、运送和检测表1粪便样本的保存、运送和检测培养条件培养基目标病原体温度细菌标本保存和运送1.Cary－Blair所有食源性致病菌室温增菌液1.改良磷酸盐缓冲液小肠结肠炎耶尔森氏菌4℃2.mEC增菌肉汤EHECO157:H7/STEC37℃3.Preston肉汤弯曲菌微需氧42℃4.SBG增菌液沙门氏菌37℃5.3%氯化钠碱性蛋白胨水弧菌37℃选择性分离平板1.Mac平板EPEC、STEC、ETEC、EIEC、EAEC、志贺氏菌37℃2.X

2、LD平板志贺氏菌37℃3.mCCD平板弯曲菌微需氧42℃4.耶尔森氏菌选择性平板小肠结肠炎耶尔森氏菌25℃5.科玛嘉O157:H7显色平板EHECO157:H737℃6.科玛嘉沙门氏菌显色平板沙门氏菌37℃7.科玛嘉弧菌显色平板TCBS平板弧菌37℃病毒标本1.采便盒轮状病毒、诺如病毒、札如病毒、星状病毒、腺病毒-20℃以下2（一）检验方法与流程（一）86（一）沙门氏菌和志贺氏菌检测操作程序1　范围本程序规定了粪便标本中沙门氏菌（Salmonella）和志贺氏菌（Shigella）的检验方法。2　检验程序沙门氏菌和志贺氏菌检验程序见图1。36℃±1℃，

3、18h～24h粪便或肛拭子挑取3个或以上可疑菌落，接种于5％羊血琼脂平板报告进行系统生化鉴定、血清学试验TSI，赖氨酸，MIO，西蒙氏柠檬酸盐琼脂，尿素SBG增菌液XLD和MAC36℃±1℃，18h～24h36℃±1℃，18h～24h直接科玛嘉沙门显色培养基TSI:K/Ag++赖氨酸:+MIO:+/-/+柠檬酸盐:+尿素:-TSI:K/Atr赖氨酸:+MIO:+/-/-柠檬酸盐:-尿素:-TSI:K/Ag赖氨酸:-MIO:+/-/+柠檬酸盐:-尿素:-TSI:K/A赖氨酸:-MIO:-/V/-柠檬酸盐:-尿素:-反应结果与左侧描述不符TSI:K/A赖氨

4、酸:-MIO:-/-/+柠檬酸盐:-尿素:-沙门氏菌属伤寒沙门氏菌甲型副伤寒沙门氏菌志贺氏菌属宋内志贺氏菌可能是肠道菌群，或者需要额外试验以排除其他致病菌或生化不典型的沙门氏菌或志贺氏菌分离株36℃±1℃，18h～24h86图1　沙门氏菌和志贺氏菌检验程序1　操作步骤1.1　标本收集标本包括新鲜的或转移至Cary-Blair运送培养基的粪便或肛拭子。最优标本是转移至Cary-Blair运送培养基的粪便拭子。肛拭子不是最佳标本，仅在病人无粪便标本时采用。肛拭子收集后应当目测，需要在拭子上明显见到粪便。所采集的标本尽快检验，放入Cary-Blair运送培养

5、基中的标本应在冷藏条件下24h内送检。新鲜的粪便标本置于清洁、干燥、无肥皂或消毒液残留的容器中，冷藏条件下8h内送检。1.2　分离培养1.2.1　直接分离培养新鲜粪便：无菌拭子采集少量粪便，尽量从可见血或黏液的部位收集；新鲜拭子在XLD和MAC一区划线；以1µL无菌接种环或接种针划线分离。在标本中再插入一个清洁的无菌拭子，将拭子放入SBG增菌液。轻拧管盖。注意：拭子表面有一层标本即可，不可将过量的标本放入SBG增菌液。肛拭子：操作程序同新鲜粪便。转移至Cary-Blair运送培养基的粪便拭子：轻搅混合标本；拭子在XLD和MAC一区划线；以1µL无菌接种

6、环或接种针划线分离；在标本中再插入一个清洁的无菌拭子，将拭子放入SBG增菌液。轻拧管盖。注意：拭子表面有一层标本即可，不可将过量的标本放入SBG增菌液。平板36℃±1℃培养18h～24h。1.2.2　增菌培养增菌液于36℃±1℃培养18h～24h，采用上述方法于科玛嘉沙门氏菌显色平板上划线分离，36℃±1℃培养18h～24h。1.3　菌落特征1.3.1　选择性平板上可疑菌落的特征见表1。表1沙门氏菌属和志贺氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征选择性琼脂平板沙门氏菌（大多数）伤寒沙门氏菌志贺氏菌属MAC琼脂菌落光滑、无色，直径2mm～3mmXLD琼脂菌

7、落呈红色，直径2mm～4mm科玛嘉显色培养基紫色或酒红色紫色或酒红色1.4　纯培养挑取3个或以上可疑菌落，划线接种5%羊血琼脂平板，36℃±1℃培养18h～24h。1.5　初步鉴定86可疑菌落接种TSI琼脂，赖氨酸脱羧酶培养基、动力-靛基质-鸟氨酸琼脂（MIO）、西蒙氏柠檬酸盐琼脂和尿素琼脂。沙门氏菌属和志贺氏菌属生化反应初步鉴别见表2。86表1沙门氏菌属和志贺氏菌属生化反应初步鉴别表项目沙门氏菌（大多数）伤寒沙门氏菌甲型副伤寒沙门氏菌志贺氏菌属TSI（斜面）KKKKTSI（底层）AAAATSI（产气）＋－＋＋TSI（硫化氢）＋少量－－赖氨酸＋＋－－M

8、IO（动力）＋＋＋－MIO（靛基质）－－－可变MIO（鸟氨酸）＋＋＋痢疾志贺氏菌、福氏志贺氏菌