凋亡相关蛋白PNAS2参与白血病发病机制的研究

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1、上海交通大学硕士学位论文凋亡相关蛋白PNAS-2参与白血病发病机制的研究姓名：刘佳申请学位级别：硕士专业：内科学血液病学指导教师：陈芳源;韩洁英20090421上海交通大学医学院硕士论文上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本授

2、权书。本学位论文属于不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日3上海交通大学医学院硕士论文凋亡相关蛋白PNAS-2参与白血病发病机制的研究摘要目的和意义PNAS-2是一种凋亡相关基因，本实验室初步研究发现其可能参与白血病起病。我们试图通过研究该蛋白在不同细胞中表达量和定位的差异及药物处理前后两者的变化以探寻PNAS-2蛋白参与白血病起病的机制。实验方法和结果第一部分，PNAS-2单克隆抗体的制备和初步鉴定。根据PNAS-2一级结构推测二级结构，选取符合条件的肽段

3、作为抗原决定簇，化学合成后和BSA偶联；通过动物免疫，细胞融合，有限稀释克隆化，腹水扩增获得敏感性高，特异性好的单克隆抗体及分泌稳定的杂交瘤细胞株S-31-7。在Wstern蛋白定量研究及免疫荧光定位研究实验中效果理想，可作为后续实验的可靠工具。第二部分，PNAS-2蛋白在细胞中表达和定位的研究。我们运用上述获得的PNAS-2单抗检测该蛋白在不同细胞中表达量和定位的差异。研究发现PNAS-2蛋白在白血病细胞株中表达量较人类非肿瘤细胞株高，在白血病初发患者的原代细胞中，其蛋白表达较缓解及非肿瘤患者高；且在白血病细

4、胞株及白血病初发、复发患者的原代细胞中，其定位与非肿瘤细胞株及非肿瘤患者原代细胞中的定位有明显差异。第三部分，PNAS-2蛋白抑制白血病细胞凋亡的机制研究。比较U937细胞株中抑制PNAS-2表达的RNA干扰组及对照组间凋亡相关蛋4上海交通大学医学院硕士论文白表达差异，探讨其抑制白血病细胞凋亡的机制。WesternBlot检测发现，抑制PNAS-2蛋白表达后，细胞株中的GraB，AIF，P53，Rb，caspase3蛋白的表达量均明显上升，说明抑制PNAS-2蛋白的表达有促进细胞凋亡,抑制肿瘤生长的作用。且PN

5、AS-2通过AIF介导的非caspase依赖途径及caspase依赖途径中的GraB-Perforin通路抑制细胞凋亡。第四部分，磷酸氯喹对白血病细胞的影响及与PNAS-2蛋白的关系。磷酸氯喹是一种生物膜稳定药物，我们发现其对白血病细胞株有诱导凋亡的作用，并且发现药物处理后细胞内PNAS-2的异常定位能够被纠正，并且表达量也相应减少。白血病患者的原代细胞经同样处理，也可得到类似效果。我们推断，PNAS-2是一种凋亡抑制蛋白，在白血病细胞中可能存在多泡体膜稳定性下降的异常现象，从而使得原本应局限于MVB膜上的PN

6、AS-2发生异常定位及过量表达，其抑制细胞凋亡的作用被放大，最终导致细胞的恶性增殖。结论PNAS-2蛋白在白血病细胞中存在异常定位和过量表达，其通过MVB途径抑制了细胞凋亡而参与了白血病的起病。磷酸氯喹能够增加MVB膜稳定性，纠正PNAS-2蛋白的异常定位和过量表达，从而促进白血病细胞凋亡，有应用临床治疗白血病的潜在价值。关键词PNAS-2，白血病发病，细胞凋亡，亚细胞定位，磷酸氯喹5上海交通大学医学院硕士论文STUDYONTHEMECHANISMOFTHEAPOPTOSISRELATEDPROTEINPNAS

7、-2PARTICIPATINGINLEUKEMOGENESISABSTRACTObjectivePNAS-2isanapoptosisrelatedgene.Theprimarystudyinourlaboratorysuggestedthatitmayparticipateinleukemogenesis.WeinvestigatedthevarianceofPNAS-2’sexpressingcontentandsubcellularlocationamongdifferentcellsandbetween

8、controlledgroupandthegrouptreatedwithchloroquinediphosphate.Inthisway,wetrytoexplorethemechanismofPNAS-2participatinginleukemogenesis.MethodsandResultsPARTⅠ,Preparationandidentificationofmonoclo