右旋柠烯对HL60、K562白血病细胞体外作用的研究

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1、右旋柠烯对HL-60、K562白血病细胞体外作用的研究作者：郭晓铭，路晴，刘正娟，王莉芬，冯秉安【摘要】　　本研究观察右旋柠烯(d-limonene，D-L)对HL-60和K562白血病细胞增殖凋亡的影响，并进一步探讨其作用机制。首先采用碘化丙锭染色法观察右旋柠烯对HL-60、K562细胞增殖的影响，再通过细胞形态学观察、流式细胞术分析、免疫细胞化学半定量测定突变型p53、bcl-2、bax基因的表达水平，系统观察D-L对HL-60、K562细胞体外诱导凋亡的情况。结果表明：D-L抑制HL-60和K56

2、2细胞的增殖，IC50均为0.75mmol/L，呈剂量时间依赖关系；D-L诱导HL-60、K562细胞凋亡；D-L在诱导HL-60细胞凋亡过程中随作用浓度增加，bcl-2的表达下降；D-L在诱导K562细胞凋亡过程中随作用浓度增加，突变型p53及bcl-2的表达下调，而bax的表达上调。结论：D-L抑制HL-60和K562细胞增值并诱导其凋亡；突变型p53，bcl-2，bax参与了D-L诱导凋亡的基因调控。【关键词】右旋柠烯；HL-60；K562细胞；细胞增值；细胞凋亡　　EffectsofD-limo

3、neneonLeukemiaCellsHL-60andK56211inVitro　　AbstractToinvestigatetheeffectsofD-limonene(D-L)onthecellgrowthandapoptosisinHL-60，K562cellsandtoelucidateitsmechanism，theinfluenceofD-LonproliferationofHL-60andK562cellswasdeterminedbypropidiumiodideassay，theexp

4、ressionlevelsofmutantp53，bcl-2，baxgeneweredetectedbycellmorphologicalanalysis，flowcytometryandimmunohistochemistrystaining，theD-L-inducingHL-60andK562cellapoptosisinvitrowasobservedsystematically.TheresultsshowedthatD-LinhibitedHL-60andK562cellgrowthinad

5、ose-andtime-dependentmannerwiththeIC50of0.75mmol/Lsimilarly，D-LinducedapoptosisofHL-60andK562cells，andexpressionofbcl-2genewasdownregulatedbyD-Linaconcentration-dependentmannerinHL-60cells.Thebcl-2，mutanttypeofp53genesweredownregulatedwhilebaxgenewasupre

6、gulatedbyD-Linaconcentration-dependentmannerinK562cells.ItisconcludedthatD-LcaninhibitproliferationandinduceapoptosisofHL-60andK562cells.Thebcl-2，mutanttypeofp53andbaxmaybeinvolvedinthegeneregulationofD-L-inducedapoptosis.11　　KeywordsD-limonene;HL-60，K56

7、2;Cellproferation;Apoptosis　　右旋柠烯（D－limonene，D-L）是一种天然单萜烯类化合物，在桔皮精油中的含量>90%，学名1-甲基-4-异丙基环己烯，分子式C10H16，分子量136.23。D-L是limonene中最普遍存在的一种异构体，具有新鲜柠檬香气和抗氧化、抗炎、利胆溶石等作用。近年发现D-L具有抗癌活性，用于预防及治疗化学致癌物诱导的结肠癌、乳腺癌、胃癌、肺癌、皮肤癌、肝癌、胰腺癌等取得了相当的效果［1-3］。目前对其抗癌作用的研究主要集中其对实体瘤的作

8、用机制上，关于其对非实体瘤的作用的研究报道尚少。本实验选用HL-60、K562白血病细胞，体外观察D-L对这些细胞增殖抑制及诱导凋亡的影响，并进一步探讨其作用机制，以期寻找新的安全有效的预防和治疗白血病的制剂。　　材料和方法　　材料　　右旋柠烯购自美国Sigma公司，含量97%，用二甲亚砜(DMSO)稀释至所需浓度。DMEM培养液(含10%胎牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素，pH7.2)，碘化丙锭(propidiumio