右旋柠烯对hl

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1、右旋柠烯对HL.freelonene，D-L)对HL-60和K562白血病细胞增殖凋亡的影响，并进一步探讨其作用机制。首先采用碘化丙锭染色法观察右旋柠烯对HL-60、K562细胞增殖的影响，再通过细胞形态学观察、流式细胞术分析、免疫细胞化学半定量测定突变型p53、bcl-2、bax基因的表达水平.freelmol/L，呈剂量时间依赖关系；D-L诱导HL-60、K562细胞凋亡；D-L在诱导HL-60细胞凋亡过程中随作用浓度增加，bcl-2的表达下降；D-L在诱导K562细胞凋亡过程中随作用浓度增加，突变型p53及bcl-2的表达下调，而bax的表达上

2、调。结论：D-L抑制HL-60和K562细胞增值并诱导其凋亡；突变型p53，bcl-2，bax参与了D-L诱导凋亡的基因调控。【关键词】右旋柠烯；HL-60；K562细胞；细胞增值；细胞凋亡EffectsofD-limoneneonLeukemiaCellsHL-60andK562inVitroAbstractToinvestigatetheeffectsofD-limonene(D-L)onthecellgroechanism，theinfluenceofD-LonproliferationofHL-60andK562cellsinedbyprop

3、idiumiodideassay，theexpressionlevelsofmutantp53，bcl-2，baxgeneorphologicalanalysis，floetryandimmunohistochemistrystaining，theD-L-inducingHL-60andK562cellapoptosisinvitroatically.Theresultsshoe-dependentmannermol/Lsimilarly，D-LinducedapoptosisofHL-60andK562cells，andexpressionofbc

4、l-2geneannerinHL-60cells.Thebcl-2，mutanttypeofp53genesannerinK562cells.ItisconcludedthatD-LcaninhibitproliferationandinduceapoptosisofHL-60andK562cells.Thebcl-2，mutanttypeofp53andbaxmaybeinvolvedinthegeneregulationofD-L-inducedapoptosis.Keyonene;HL-60，K562;Cellproferation;Apopt

5、osis右旋柠烯（D－limonene，D-L）是一种天然单萜烯类化合物，在桔皮精油中的含量90%，学名1-甲基-4-异丙基环己烯，分子式C10H16，分子量136.23。D-L是limonene中最普遍存在的一种异构体，具有新鲜柠檬香气和抗氧化、抗炎、利胆溶石等作用。近年发现D-L具有抗癌活性，用于预防及治疗化学致癌物诱导的结肠癌、乳腺癌、胃癌、肺癌、皮肤癌、肝癌、胰腺癌等取得了相当的效果［1-3］。目前对其抗癌作用的研究主要集中其对实体瘤的作用机制上，关于其对非实体瘤的作用的研究报道尚少。本实验选用HL-60、K562白血病细胞，体外观察D-L对

6、这些细胞增殖抑制及诱导凋亡的影响，并进一步探讨其作用机制，以期寻找新的安全有效的预防和治疗白血病的制剂。材料和方法材料右旋柠烯购自美国Sigma公司，含量97%，用二甲亚砜(DMSO)稀释至所需浓度。DMEM培养液(含10%胎牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素，pH7.2)，碘化丙锭(propidiumiodide，PI)，毛地黄皂苷（digitonin)，DMSO均购自于Sigma公司。突变型p53，bcl-2及bax鼠抗人即用型IgG单克隆抗体购自福州迈新生物公司。细胞凋亡Hoechst染色试剂盒购自于碧云天生物技术研究所。方法

7、细胞培养人白血病细胞株HL-60(人早幼粒细胞白血病细胞株)，K562(人慢性粒细胞白血病细胞株)由大连中心医院中心实验室惠赠，常规培养于含10%胎牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素，pH7.2的DMEM培养液中，置于37℃、5%CO2、饱和湿度孵箱中培养。加药均在细胞的对数生长期进行。细胞生长曲线的碘化丙锭(PI)染色法测定［4］碘化丙锭染色法的原理：PI为核酸嵌入型染料，可嵌入双股螺旋多核苷酸的结构，但是不能穿过活细胞的胞膜，故活细胞拒染，PI染色后的细胞呈红色荧光，其光密度可在波长530nm酶标仪下检测。Digitonin可以

8、破坏细胞的胞膜，这样经过digitonin处理后，就可以检测到总的细胞光密度。将对数生长期的白血病细胞以每孔