CpGODN的免疫刺激作用

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1、CpG-ODN的免疫刺激作用陈军浩南京大学医学院附属鼓楼医院CPG概念为非甲基化的胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸重复序列，即CpG基序。一种免疫佐剂作用靶点TLR9细胞免疫，体液免疫Th1免疫应答慢性乙型肝炎患者细胞免疫低下HBV免疫耐受，持续感染肿瘤微小残留病的清除CPG提高PBMC中Th1细胞Th1占淋巴细胞百分比CPG提高PBMC中Th1、Tc1细胞百分率***：与对照组比较，P<0.05CPG刺激BPMC分泌细胞因子**：与对照组比较，P<0.05CPG诱导PBMC杀伤靶细胞收集CPG活化的PBMC细胞毒性实验：效应细胞为CPG活化的PBMC；靶

2、细胞为CFSE预染的K562细胞。对照组效应细胞为未经CPG活化的PBMC。效：靶＝20：1，混合培养2h。流式细胞术检测靶细胞死亡率。CPG诱导PBMC杀伤靶细胞CFSE染色靶细胞浓度为5μmol/L的CFSE（2羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯）工作液取对数生长期的靶细胞浓度108/L细胞悬液与等体积CFSE工作液混合37℃孵育10min。离心洗涤两次后悬浮细胞备用CFSE染色靶细胞实验结果CpG活化PBMC对K562细胞的杀伤作用(N=5)CPG活化PBMC16.85±5.14%对照组8.62±2.83%**：与对照组比较，P<0.05CI

3、K细胞杀伤靶细胞CIK细胞杀伤靶细胞研究背景通过主动免疫、过继特异性免疫、过继非特异性免疫等方式，清除慢性乙肝患者体内残存的HBV，达到治疗效果。研究背景B淋巴细胞具有抗原递呈细胞的性质，同时具有CpG-ODN受体：TLR-9。本研究探讨CpG-ODN诱导B淋巴细胞成为高效APC，使之具有类似于树突状细胞功能的可行性。TOLL受体TOLL受体在血细胞中的表达活化B细胞负载核心抗原磁珠分选B淋巴细胞CPG活化B淋巴细胞核心抗原肽:FLPSDFFPSV-FITC流式细胞仪、荧光显微镜检测抗原负载状况磁珠分选B细胞分选前B细胞7.89%分选后B细胞8

4、9.6%活化B细胞负载抗原肽活化B细胞负载核心抗原荧光显微镜观察B细胞负载HBcAg18-27肽APC与T细胞作用机制CPG对B细胞抗原递呈相关分子的作用研究CpG2006、2216由上海生物工程技术服务有限公司合成，全硫代化修饰对照组为含10%FCS的RPMI1640＋外周血PBMC，细胞量107/孔，37℃、5%CO2、48小时实验组加入CpG2006或CpG2216，终浓度均为1umol/mL，余同上CpG提高淋巴细胞CD69表达T淋巴细胞B淋巴细胞CD69表达率（%）***：与对照组比较，P<0.05B细胞CD80、CD86表达对照组加

5、CPG-ODN组加CPG-ODN组CpG提高B细胞表面CD80、CD86的表达CD80CD86CD80、CD86表达率（%）*****：与对照组比较，P<0.05B细胞MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ表达对照组加CPG-ODN组CpG提高B细胞表面MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ的表达MHC-ⅠMHC-ⅡMHC表达量（MFI）*****：与对照组比较，P<0.05活化B细胞诱导CTL负载了抗原的活化B细胞与淋巴细胞混合培养(含IL-2的RPMI1640培养液).收集细胞,以五聚体技术检测HBV特异性CTL.实验组特异性CTL为0.50±0.19%，对照组为0.20

6、±0.10%。特异性CTL诱导Pro5TMMHCPentamers检测对照组和实验组HBcAg18-27抗原特异性CTL（Q2-1区）。前者为对照组（未加APC），后者为实验组（加APC）。结论CpG能够活化B细胞，对T细胞无明显的作用CpG能够提高B细胞表面抗原递呈相关分子的表达CPG诱导PBMC产生高水平的IFN-γCPG诱导淋巴细胞向Th1、Tc1分化CPG增强PBMC对K562细胞的杀伤作用通过B细胞介导,CPG可诱导特异性CTL