过敏原特异性IGE检测芯片的研制及初步应用

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1、79787‘,图书分娄与：R318：R593山东单位代码：88501学号：02047省医学科学院硕士学位论文论文题目过敏原特异性IgE检测芯片的研制及初步应用论文类型研究所(院)姓名专业指导教师职称应用研究山东省医药生物技术研究甲心胡洁微生物与生化药学韩金祥，失有名研究员论文完成El期2005年5月学位论文独创性声明本人声明，所呈交的学饿论文系在鼯师指导下本人独立完成的研究成果。文中引用镶久戆或暴，均已骰塞鞠确搽注袋褥到诲霹。论文内容寒惫含法黪懑义上已属予恁人篷任何形式的研究成果，也不包含本人已用于

2、其他学位申请的论文或成果。学位论文知识产投权鼷声明本人在导师指导下所完成的论文及相关的职务作晶，知识产权归属山东省鼷学科学院。出东省医学秘学院享鸯戳任薅方式发表、复铡、公开阅览、爨越玟及串请专裁等毅利。本人离校瑶发表或使髑学位论文或与该论文直接籀关的学术论文或成果时，署名单能仍然为山东省医学科学院。论文作者签名：鼯师签名：El期：——年——月——日日期；——年——月——目山东省朦学科学院2005脯硕十：研究生学能论文中文摘要I型变态反应是一种]gE水平异常增高的疾病状态，涉及儿科、内科、耳鼻嚷科秘皮

3、获辩等多个学辩，严重者可以弓

4、起过敏悭傣克甚至死亡。世赛上大约有1／4的入饱受I型变森反应困撬。邋几年，随麓生活环境和生活方式的改变，新的变应原不断出现，发病率日渐增多。过敏原的检测可以在早期识别敏感痫人，决定后续预防与治疗掺施。目前对道敏原的体外检测方法(EAST、EuSA)操作繁蘩、爨辩，每次哭鼹检溅一穗藏黉少数兄耱远敏藤，露侈为鬻怒捡溅豹过敏原有200余种，这给临脒医生在选择检测项目和舆体操作时带来困难。目的：研制～种可同时梭测18种过敏原特异性leE的蛋自厦蕊片，并初步旋用于箍床检溅，为将来

5、给稻霖提供一稀离效实霜镌避敏原特冥毪IrE硷溺技术与方法奠定基础。方法：1．过敏原提取液驻液的蛋自浓度测定与浓缩处理；2．以多壤赖氨酸处穗玻片、警酵楚壤PVDF膜泞、PBS楚璎硝酸绎维素膜片纛尼蠢簇蔑为露褶载髂，涮备不同基片的芯片，对海鱼特异性IgE阳性的同一标本进行检测，根据检测结果优选固相簇片；3．分别以戊二醛、乙醇和丙酮作为化学药物交联荆，对过敏原点徉最戆霾愆条磐进蠢俊识；4。用L

6、6(44x23)正交法对芯片割豢及疆秀条终遴牙优化。Scanarray4000激光共聚扫描仪成像，Ouantar

7、ray软件分析荧光强度；5．根据上述结粜制备可同时检测18种过敏原的蛋白质芯片并对芯片的检测灵敏性、重复性和稳定蛙进彳亍梭测；6．本芯片鞠lVT试裁鑫对138份抵零送行对}￡梭测，SPSS统计分析软件分掰检测结果。结果：选择硝酸纤维素膜为圆相基片，制备条件与过程为：1)配制过敏原点样液；2)点样后37。C瀑鑫中固定2h；3)0．1％戊二醛室温下化学固定0．5h；4)洗膜；5)2％BSA37℃湿盒中封闭2h。使用条件及步骤：1)1：8稀释待检血清后与芯片37。C灞盘中杂交2h；2)洗摸；3)热2．5／

8、￥g／mL生物素37。C滠鑫中孵育lh：4)1．25,ug／mL亲和素37。C漫盒串孵育lh；5)洗膜、千澡后扫籀。芯片的检测灵敏性、重复性、稳定性好，血清稀释128倍仍可检测到特异性lee的存在。与IvT试裁盒进行比较，两种方法对鸡蛋、海鱼、大豆、花生、大籽蒿花粉警大部分过敏缀髂裣出奉无羞异(盖2稔验p>0。05)，粥往检溅符合率秀60．】9％。第3页山东省医学科学院2005届硕士研究生学位论文结论：过敏原特异性IgE检测芯片，将目前对过敏原特异性IgE的单一检测(或少数几种的检测)变为多种同时检

9、测，具有样本用量少、检测指标多、操作简便、价格低廉等优点。这是国内首次应用蛋白质芯片技术对多种过敏原进行检测。该方法具有较强的l临床检测使用价值，是未来诊断试剂的发展方向。【关键词】蛋白质芯片；超敏反应，速发型：过敏原；正交设计第4页山东省医学科学院2005届硕士研究生学位论文AbstractTypeIallergyisanimmunoglobulinE(IgE)··mediatedhypersensitivitydiseasein—flictingmorethanquarteroftheworld

10、population，andthenumberofpeopleexhibit_ingsymptomsofanallergicresponsetovariousnaturalandsyntheticcompoundshasincreaseddramatically．TheidentificationofthespecificIgEcurrentlyusedinvitroaretime-consuming,andtheycandetectonlyoneorafewkind