通络益肾汤对DN模型大鼠肾组织αSMA表达影响的实验研究

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1、通络益肾汤对DN模型大鼠肾组织α-SMA表达影响的实验研究作者：董正华,杨薪博,应小平，宋春光，范丽，李小会【摘要】　　目的观察通络益肾汤对糖尿病肾病（DN）大鼠肾小管上皮及间质平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的影响，探讨本方对DN模型大鼠肾保护作用的可能机制。方法采用单侧肾切除+STZ诱导DN大鼠模型，大鼠随机分为正常组、病理组、通络益肾汤治疗组、西药治疗组。观察各组大鼠治疗后肾功能（BUN、Scr）、24h尿蛋白定量（24hUpr）、尿β2微球蛋白（β2-MG）含量、肾脏肥大指数及肾组织α-SM

2、A的表达等指标的变化。结果与病理组比较，通络益肾汤治疗组大鼠肾脏肥大指数、BUN、Scr显著改善（P<0.01），24hUpr、尿β2-MG明显下降（P<0.01），肾小管上皮及间质α-SMA阳性表达率明显下降（P<0.01），与西药组比较，各项指标无显著性差异（P﹥0.05）。结论通络益肾汤可能通过降低肾小管上皮α-SMA的表达，抑制肾小管上皮-间质细胞转分化，延缓肾小管间质纤维化，从而达到保护肾脏，改善肾功能的目的。【关键词】通络益肾汤　糖尿病肾病　α-平滑肌肌动蛋白8　　糖尿

3、病肾病（DN）是糖尿病（DM）发展到一定阶段而出现的主要并发症之一。DN持续、进行性发展，将导致终末期肾脏病(ESRD)。肾间质纤维化是导致ESRD的主要原因和共同病理过程，肾小管上皮-间质细胞转分化（EMT）则是肾间质纤维化的重要发病机制之一［1］，肾小管间质α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）又是EMT的标志因子［2］。此前我们针对DN肾亏阴阳两虚、血络瘀阻的病机，使用通络益肾汤治疗DN，临床取得较好疗效［3］。本实验通过观察通络益肾汤对DN模型大鼠肾小管上皮-间质细胞转分化中α-SMA表达的影响，

4、探讨其对DN肾间质纤维化的影响，揭示其肾保护作用的可能机制。　　1材料　　1.1动物SD雄性大鼠，60只，体质量(180±20)g，由第四军医大学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK(军)2007-007（08034）。　　1.2用药及试剂通络益肾汤由桃仁、水蛭、生地、酒大黄、山萸肉、山药、黄芪等组成，大鼠用量按文献折算［4］。药物经常规煎煮、过滤，水浴蒸发至每毫升含生药2.23g，置于4℃冰箱保存备用。洛汀新：北京诺华制药有限公司生产，批号X1036；糖适平：北京万辉双鹤药业有限责任公司生产，

5、批号070822。链脲佐菌素（STZ）：购自sigma公司，批号S8050。α-SMA试剂盒，购自武汉博士德生物工程有限公司。8　　2方法　　2.1模型复制及分组给药大鼠购回后适应性喂养1周，称体重，经尿糖、尿蛋白定性检测为阴性后，随机抽取9只作为正常对照组（A组）。所有大鼠以10%水合氯醛3.5ml/kg腹腔注射麻醉、备皮、常规消毒，在背部左肾区做1～1.5cm切口，A组仅暴露出左肾，用玻棒拨动后，缝合切口。模型组大鼠暴露左肾，剥离肾脏脂肪及肾上腺，结扎左肾门血管，切除左肾，缝合切口。碘伏消毒，红

6、霉素软膏涂抹创口。术后1周，模型组按50mg/kg体重腹腔内注射2%STZ溶液，A组腹腔注射等量的枸橼酸钠缓冲液。72h后经尾静脉取血，测空腹血糖高于16.7mmol/L为DM模型成功。1周后，随机抽取两只测尿微量白蛋白﹥15μg/ml，确定DN模型形成［5,6］。将造模成功后的43只大鼠随机分为病理组15只（B组），通络益肾汤治疗组14只（C组），西药治疗组14只（D组）。A、B组分别给蒸馏水2ml灌胃，C组给通络益肾汤煎液灌胃（22.3g/kg）,D组给洛汀新（1.5mg/kg）＋糖适平（10m

7、g/kg）蒸馏水混悬液灌胃。以上给药均1次/d，共持续10周。　　2.2观测指标及方法24hUpr、尿β2-MG测定：治疗结束后于处死前1d，代谢笼收集尿液，检测24hUpr、尿β2-MG含量；治疗结束后，腹腔麻醉下心脏采血，全自动生化分析仪检测BUN，Scr；大鼠处死后取肾脏称重，计算肾脏肥大指数（肾重KW/体重BW）；摘取右肾，肾组织常规石蜡包埋，切片，按α8-SMA试剂盒操作说明，免疫组化法测定α-SMA表达。　　2.3资料统计与分析各组数据以±s表示，组间比较采用t检验。所有数据统计学处理运

8、用SPSS13.0进行分析。　　3结果　　3.1治疗后各组大鼠肾功能、肾脏肥大指数的比较结果见表1。表1各组模型大鼠肾功能、肾脏肥大指数的比较（略）B组大鼠BUN、Scr、肾脏肥大指数较A组明显增高，均有极显著性差异（P<0.01）；与B组比较，C组、D组大鼠BUN、Scr、肾脏肥大指数明显降低，具有极显著性差异（P<0.01）。C、D两组比较，上述指标无明显差异（P＞0.05）。说明通络益肾汤和西药治疗在改善DN大鼠肾脏肥大指数、肾功能方面有都有比较理想