农杆菌介导木薯“新选048”遗传转化体系的初步建立

《农杆菌介导木薯“新选048”遗传转化体系的初步建立》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、农艳硕士学位丰论文硕士农杆农杆菌介导木薯“新选048”遗传转菌介化体系的初步建立导木薯新选048遗传农艳丰转化体系的初步二○一四年六月建立2014分类号S533密级公开UDC硕士学位论文农杆菌介导木薯“新选048”遗传转化体系的初步建立农艳丰学科专业作物栽培学与耕作学指导教师杨美纯教授论文答辩日期2014年5月21日学位授予日期2014年6月28日答辩委员会主席杨丽涛教授广西大学学位论文原创性和使用授权声明本人声明所呈交的论文，是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除已特别加以标注和致谢的地方外，论文不包含任何其他个人或集体已经发表或

2、撰写的研究成果，也不包含本人或他人为获得广西大学或其它单位的学位而使用过的材料。与我一同工作的同事对本论文的研究工作所做的贡献均已在论文中作了明确说明。本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品，知识产权归属广西大学。本人授权广西大学拥有学位论文的部分使用权，即：学校有权保存并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。本学位论文属于：□保密，在年解密后适用授权。□不保密。(请在以上相应方框内打“√”)

3、论文作者签名：农艳丰日期：2014.06.24指导教师签名：杨美纯日期：2014.06.24作者联系电话：电子邮箱：nongyan889@126.com缩写词Englishabbreviationusedinthedissertation缩写英文全称中文名称AbbreviationFullnameinEnglishFullnameinChinese6-BA6-Benzylaminopurine6-苄基腺嘌呤NAANaphthylaceticacid萘乙酸IBAIndolebutyricacid吲哚丁酸IAAIndol-3-aceticacid吲哚

4、-3-乙酸GA3Gibberellin赤霉素TDZThidiazuron噻苯隆KT6-furfurylaminopurine6-糠基氨基嘌呤2,4-DDichlorophenoxyaceticacid二氯苯氧乙酸METPaclobutrazol多效唑ZTZeatin玉米素KmKanamycin硫酸卡那霉素GMGentamycin庆大霉素CTXCefotaximesodium头孢噻肟钠SMStreptomycin链霉素CTRXCeftriaxoneSodium头孢曲松钠ACActivatedCarbon活性炭农杆菌介导木薯“新选048”遗传转化体系

5、的初步建立摘要木薯是重要的旱地经济作物及能源植物，广西是我国木薯的主产区，木薯“新选048”品种是广西主栽品种之一，具有抗旱、高产的特点，具有很好的经济价值。通过农杆菌介导，在优良木薯品种中转入抗逆性基因，获得既高产优质又具抗性的木薯新品种，是木薯育种的有效途径。本研究通过农杆菌介导，在木薯“新选048”中转入抗逆性基因，获得如下研究结果：1.以腋芽为外植体的再生体系建立灭菌：春秋季节取外植体，以0.1%HgCl2处理12min灭菌效果最好，污染率控制在30%以内，而成活率达到56.7%。初代诱导培养：添加KT的培养基外植体萌芽率比添加6-BA和

6、TDZ的要高，最适培养基为MS+KT0.5mg/L，外植体腋芽萌发率可达85.0%，增殖培养：细胞分裂素与NAA配比的效果比单使用细胞分裂素或者与赤霉素配比的都好，以MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L培养基为最佳的增殖培养基，增殖率高，平均芽高度最高，可达5cm。生根培养：在合适的浓度下，单独添加NAA、IBA、IAA的培养基诱导的生根率都可达到100%，平均根数以MS+NAA0.6mg/L培养基的最多，达6.9条。移栽：控制空气湿度尤为重要，相对湿度太大，则容易引起组培苗植株茎段发霉腐烂，影响成活率。试验中，移栽18d后存活率不

7、足10%，因此移栽技术还需进一步的研究。2、无菌叶片再生体系的建立选择无菌叶片诱导愈伤组织，最适诱导培养基为MS+2,4-D5.0mg/L，诱导率可达90%以上，愈伤组织淡黄色透明松软，在进一步培养中容易转化为胚性愈伤组织。愈伤组织的增殖培养基则以MS+2,4-D3.0mg/L为适宜，增殖率为90%。愈伤组织分化采用6-BA和NAA配合以及硫酸铜两种处理来诱导不定芽，结果6-BA和NAA配合处理并没有无菌芽的分化，而MS+CuSO4200mg/L处理有不定芽分化，但分化率不高。3、遗传转化体系的初步建立以无菌叶片和愈伤组织作为材料进行抗生素选择压

8、的试验，以确定培养材料细胞全部死亡的最低抗生素浓度。试验结果为叶片抗生素选择压的培养基为MS+3.0mg/L2,4-D+2.3g/LKm