川牛膝多糖的制备、结构解析及其体外抗病毒活性的研究

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1、川牛膝多糖的制备、结构解析及其体外抗病毒活性的研究刘颖华(微生物学)指导教师:何开泽副研究员摘要It}牛膝(CyathulaofcinalisKuan)是一种具有重要药理作用的常用传统中药，现代药理研究表明其所含的多糖成份是许多生物活性的物质基础，如前人研究证明川牛膝多搪具有促进红细胞免疫、抗肿瘤、减轻环磷酞胺Cy(Cyclophosphomidum)所致外周白细胞减少等疗效。为了进一步了解其生物活性，并为构效关系的研究奠定基们利用本实验室开发的专利方法从川牛膝中提取到一小分子量多糖，对其进行了如1.提取粗多糖CPc，利用68

2、5弱碱阴离子交换柱层析和Bio-GelP2分子筛柱层析制得纯品多糖RCP;2.RCP经紫外扫描(UV)、高效液相色谱(HPLC)和聚丙烯酞胺盘状凝胶电泳(PAGE)鉴定为纯品;3.用薄层正交法确定了RCP完全水解和部分水解的最佳条件;4.薄层层析(TLC)、红外光谱(1R)、质谱(MS)、核磁共振(NMR)、高碘酸氧化与Smith降解、甲基化与还原裂解乙酞化等分析表明川牛膝多糖RCP是以果糖为主，葡萄糖为辅的峡喃型的高度分支的果聚糖。果糖以0构型存在，葡萄糖以a构型存在。RCP的平均聚合度DP=15，以(2-1)连接为骨架，其

3、上有大盈(2--6)连接的分支，分支长度为2个果糖残基，葡萄糖主要以新蔗果三糖的形式存在于链中，但(2-6)分支的具体位置不能确定;5.用细胞病变效应法和MTT染色法测定了RCP及其硫酸酷衍生物S-RCP的体外抗HSV-2和HBV的活性。实验证明RCP本身无抗病毒活性，而硫酸酣衍物S-RCP获得抗HSV-2的活性。令关键词:川牛膝，多糖抗病毒活性1`Z}{1.tStudiesonthepreparation,structureanalysisandantiviralactivitiesinvitroofpolysacchari

4、defromCyathulaofficinalisKuanYinghuaLiu(Microbiology)DirectedbyAssociateProf.KaizeHeABSTRACTCyathulao挤cinalisKuanisacommonly-usedtraditionalChineseherbalmedicinewithawiderangeofpharmacologicalactivities.Modernpharmacologicalresearchesshowthepolysaccharideextractfrom

5、itisthebasicelementformanybioactivities.Formerstudiesprovethepolysaccharidehastheabilitytoimprovemouseredcellimmunityfunction,suppressthegrowthofmousetumorandlivercancercells,inhibit加ripheralwhitebloodcelldecreasecausedbyCyclophosphomidum(Cy)invivo.Inordertoinvestig

6、ateitsbioactivitiesfurtherandlayfoundationofthefuturestudyontheStructure-Functionrelationship,weisolatedalow-molecular-weightpolysaccharide(RCP)fromCofeinalisKuanwithpatentmethodestablishedbyourlabandcarriedoutthefollowingworks:1.ThecrudepolysaccharidenominatedCPcwa

7、spurified勿685alkalescentanionexchangeresinchromatographyandBio-GelP2chromatographytoyieldpurifiedpolysaccharideRCP.2.ThepurityofRCPwasconfirmedbyUltraviolet(UV)Scanning,HighPerformanceLiquidChromatography(HPLC)andPolyacrylamideGelElectrophoresis(PAGE).3.Theoptimumco

8、mpleteandpartialhydrolysisconditionofRCPwasestablishedbyTLC-Orthogonalexperiments4.UsingThinLayerChromatography(TLC),InfraredSpectrum(IR),