流动注射后化学发光法测定阿米卡星

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1、流动注射后化学发光法测定阿米卡星【摘要】过氧化单硫酸盐具有很强的氧化性，本实验发现，在pH=11.5的条件下，过氧化单硫酸盐(PMS)可以氧化鲁米诺(Luminol)产生瞬时化学发光，发光结束后注入阿米卡星又会出现很强的慢速后化学发光。结合流动注射的方法，利用此体系建立了流动注射后化学发光测定阿米卡星的新方法，并对其后化学发光反应的动力学性质、化学发光光谱进行了研究，讨论了可能的反应机理。阿米卡星浓度在4.0×10-5～8.0×10-2g/L范围内与发光强度呈良好的线性关系，检出限(3σ)为1×10-5g/L，相对标准偏差为2

2、.9%。本方法具有选择性好、操作简单、分析速度快和重复性好等优点，已成功用于尿液中阿米卡星含量的测定，结果令人满意。【关键词】流动注射，后化学发光，过氧化单硫酸盐，鲁米诺，阿米卡星1引言　　阿米卡星(Amikacin，结构式为:)为半合成的氨基糖苷类抗生素，主要应用于治疗对卡那霉素和庆大霉素耐药革兰氏阴性杆菌所致的尿路、下呼吸道、腹腔、软组织、骨和关节、生殖系统等部位的感染以及败血症等。与其它氨基糖苷类抗生素一样，使用过程中对听觉和肾脏存在毒副作用，必须严格控制阿米卡星的临床用量[1]。10　　测定阿米卡星的药典方法为微生物法

3、，但该法耗时长，操作复杂，灵敏度较低，且易被干扰。文献报道测定阿米卡星的方法有高效液相色谱法[2]、毛细管电泳法[3]、荧光法[4]、紫外分光光度法[5]及薄层色谱法[6]等。荧光法或紫外分光光度法测定时需要使用荧光试剂或其它试剂进行衍生，试样处理操作繁琐、干扰因素多。薄层色谱法操作程序过多，影响因素不易消除，分离效果较低，重现性较差。　　化学发光分析结合流动注射技术分析法，因具有灵敏度高、线性范围宽、分析速度快和仪器操作简单等优点，使得化学发光检测法成为一种有效的痕量及超痕量分析技术，在药物分析领域得到了广泛的应用[7,8]

4、。本研究组曾采用N溴代琥珀酰亚胺(NBS)荧光素体系化学发光法测定阿米卡星[9]，但选择性较差，不能直接用于生物样品中阿米卡星的测定。　　过氧化单硫酸盐(HSO-5，Peroxymonosulfate，PMS)有较强的氧化性，可以在三聚盐过硫酸氢钾制剂(K2SO4·KHSO4·2KHSO5)中稳定存在。Magdaleno等[10]采用PMS直接氧化化学发光法来测定腐殖质;也有利用PMS的氧化性结合化学发光法测定一元羧酸[11]和荧光有机化合物[12]的报道。本研究发现，在碱性介质中鲁米诺可以被PMS氧化,10产生瞬时化学发

5、光，发光结束后注入阿米卡星又会产生很强的慢速后化学发光，发光强度与阿米卡星浓度在一定范围内成正比。基于此，建立了测定痕量阿米卡星的流动注射后化学发光分析方法。与其它方法相比，本方法具有选择性好、操作简单、重现性好及快速等优点，已用于制剂和尿样中阿米卡星含量的测定。　　2实验部分　　2.1仪器与试剂　　IFFMD型流动注射化学发光分析仪(西安瑞迈电子科技有限公司);精密pH计(上海雷池仪器厂);TU1901紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限公司);F4600荧光分光光度计(日本日立公司)。0.01mol/LPMS储备液：

6、当天配制，准确称取三聚盐过硫酸氢钾制剂(K2SO4·KHSO4·2KHSO5，Alfa公司)0.3078g溶解并定容至100mL容量瓶中，使用时适当稀释。10mmol/L鲁米诺储备液：准确称取1.77g鲁米诺(陕西师范大学分析科学研究所合成)，P1,P2.蠕动泵(Peristaltic);V.进样阀(Valve);F.流通池(Flowcell);PMT光电倍增管(Photoelectricmultiplyingtube);HV.负高压(Highvoltage);PC.计算机(Computer);R1.Peroxymonosul

7、fate(PMS);R2.鲁米诺(Luminol);R3.样品(Sample);R4.载流水(Carrier)用10mL1.0mol/LNaOH溶解，加水定容于1000mL容量瓶中，室温下放置7d后使用。1.0g/L阿米卡星储备液：准确称取50mg硫酸阿米卡星(中国药品生物制品检定所提供)，溶于水中，定容至5010mL，使用时稀释到所需浓度。所用试剂均为分析纯，实验用水均为二次蒸馏水。　　2.2实验方法　　如图1连接流路，泵入PMS、鲁米诺、载流水和样品。测定样品的化学发光强度，以相对峰高定量。　　3结果与讨论　　3.1实验条

8、件的优化　　3.1.1流速的影响在本化学发光体系中，流速太慢会导致最大发光在流通池之前，流速太快会导致最大发光在流通池之后。本实验考察了0.8～2.5mL/min范围内流速对化学发光强度的影响，主泵(图1中P1)流速为1.5mL/min，副泵(图1中P2)流速为2.0mL/m