孕妇血浆胎儿DNA检测及其在产前诊断中的应用

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1、孕妇血浆胎儿DNA检测及其在产前诊断中的应用作者：王修海姜晓静纪向虹【摘要】目的检测孕妇血浆中游离胎儿DNA的水平，探讨应用孕妇血浆胎儿DNA进行非损伤性产前基因诊断的可行性。方法应用血浆DNA抽提法提取63例孕7～40周妇女血浆中胎儿DNA，运用PCR扩增技术对SRY基因和4个短串联重复序列（STR）多态位点（D21S11、D21S1411、D21S1412、D21S1414）进行检测。结果在33例妊娠男胎的孕妇血浆中，有29例出现SRY基因扩增带，孕早、中、晚期的SRY基因检出率分别是72.7

2、%(8/11)、90.9%(10/11)、100%(11/11)。用4个单一STR多态位点检测出胎儿特异等位基因的比例分别为51/63、49/63、16/63、48/63。联合应用4个多态位点可以确定所有孕妇血浆中的胎儿DNA。结论在不同的妊娠阶段都可检测到孕妇血浆中的胎儿DNA，胎儿DNA检出率随孕周的增加增高。孕妇血浆中游离胎儿DNA可以用于无创伤产前诊断。【关键词】胎儿DNA产前诊断聚合酶链反应串联重复序列［ABSTRACT］ObjectiveTodetecttheregularityofa

3、ppearanceanddisappearanceoffreefetalDNAinplasmaofpregnantwomenandtoexplorethepossibilityofnoninvasiveprenatalgenediagnosisbyusingfetalDNAinmaternalplasma.MethodsTheDNAtemplateswereextractedbyplasmaDNAextractionfrom639gravida(conceived6-40weeks)plasma.

4、SRYgeneandfourshorttandemrepeats(STRs)(D21S11,D21S1411,D21S1412,D21S1414)offetalDNAweredetectedbypolymerasechainreaction(PCR).ResultsSRYgenewasdetectedin29of33malebearingpregnantwomenplasma.ThedetectingratesofSRYgenewere72.7%(8/11),90.9%(10/11)and10

5、0%(11/11)atearlypregnancy,mediumtermpregnancy,andlatepregnancy,respectively.Thedetectingratesofafetalspecificbandwere51/63,49/63,16/63,and48/63bymeansoffoursingleSTRsanalysis,respectively.ThefetalDNAinplasmawasidentifiedinallpregnantwomenbycombining

6、withfourSTRsanalysis.ConclusionFetalDNAinmaternalplasmacanbedetectedindifferentgestationalstages.ThedetectionratesoffetalDNAinmaternalplasmaincreasewiththeweekofgestation.FetalDNAinmaternalplasmacouldberegardedasthegeneresourcefornoninvasiveprenataldi

7、agnosis.［KEYWORDS］fetus;DNA；prenataldiagnosis；polymerasechainreaction；tandemrepeatsequences9产前诊断是预防遗传病的重要手段。目前，产前诊断所使用的材料一般是通过羊膜穿刺术等损伤性手段获取,这些方法对母儿有一定的危险性。孕妇外周血中胎儿细胞的发现为非损伤性产前诊断带来希望，但仍存在操作复杂、仪器试剂昂贵、胎儿细胞含量低等一些无法克服的问题，限制了其在临床产前诊断中的应用。1997年有学者发现在母体血浆中存在着

8、游离胎儿DNA［1］,这一发现为非损伤性产前诊断开辟了新的途径。本研究以母体血浆中提取的DNA为材料，通过PCR扩增Y染色体上的特异序列检测胎儿DNA的存在及其消长规律,并应用21号染色体的4个短串联重复序列（STR）位点为遗传学标记，检测孕妇外周血浆中的胎儿父源特异性序列,以鉴定女性胎儿DNA的存在。1对象和方法1.1对象选择2002年3～12月在青岛市市立医院、青岛市计划生育研究所就诊的不同孕周（6～40周）孕妇63例，各取外周血2mL（ACD抗凝），孕妇年龄24～30岁。其中