猪体细胞核移植去核效率的研究

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1、上海交通大学硕士学位论文猪体细胞核移植去核效率的研究姓名：朱秀萍申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：朱淑文20060101的去核成功率P<0.05而卵母细胞的溃破率显著低于其它处理组和对照组P<0.05CB在体外成熟培养的猪卵母细胞去核操作中3能提高去核成功率并减少卵母细胞质膜的破溃浓度在51036.510mg/mL较为理想2.不同激活剂对猪卵母细胞化学诱导去核法去核效率的影响用7乙醇10mg/L细胞松弛素B0.1mM的氯化钙分别预激活卵母细胞后化学诱导去核结果标明,激活剂处理后的卵母细胞与未处理的卵母细胞形态略有差异7%乙醇激活处理的卵母细胞染色质收缩细胞皱缩和变形10m

2、g/LCB激活后的卵母细胞形态上与未处理的卵母细胞差异不显著0.1mM的CaCl2激活后引起卵母细胞孤雌发育发生卵裂各组之间的去核率差异显著P<0.05其中10mg/LCB激活组的去核率显著高于其它各组P<0.053.猪卵母细胞体外成熟培养时间及去核方法的研究将卵母细胞的成熟培养分成不同的时间组分别采用盲吸法和化学诱导去核法去核结果表明不同时间成熟培养的卵母细胞用盲吸法去核体外成熟培养IVM39-41h组去核率最高与IVM36-38h组差异显著P<0.05与42-44h两组差异不明显,但三组去核率显著高于IVM45-48h组P<0.05不同时间成熟培养的卵母细胞经化学去核,IVM3

3、6-38h39-41h42-44h,45-48h的去核率分别为44.09%55.58%,58.12%,36.12%IVM42-44h去核率最高但与IVM39-41h的去核率差异不显著P>0.05与其他各组之间差异显著P<0.05在相同的时间组内盲吸法的去核率比化学诱导法II的去核率高IVM42-44h两种方法的去核率差异不显著IVM36-38h39-41h45-48h两种方法的去核率差异显著P<0.05显示不同的去核方法对卵母细胞体外成熟培养时间不同盲吸法去核的最佳时间在39-41h化学诱导去核的时间以42-44h成熟培养为宜4.猪耳成纤维细胞核移植研究以猪耳成纤维细胞为供核体细胞

4、用胞质内注射法进行猪体细胞核移植核移植48h后重构胚的卵裂率为盲吸法去核后的卵母细胞体细胞注入后的卵裂率为20%化学诱导去核卵母细胞核移植后的卵裂率为25%两者之间无显著差异(P>0.05)两组核移植胚胎均未发育到囊胚期关键词猪卵母细胞去核盲吸法化学诱导去核核移植IIIRESEARCHONTHEENUCLEATIONEFFICIENCYOFSOMATICCELLNUCLEARTRANSFERINPORCINEABSTRACTInthisstudy,theovariesofpigsareusedasasourceofoocytesfromalocalslaughters.Theooc

5、ytesarecollectedandculturedinvitromaturation(IVM).TheinfluenceofdifferentconcentrationofcytochalasinBontheporcineoocytesenucleationratewithphysicalenucleation,thedifferentactivatortooocytespre-activationbychemical-inducedenucleationinvolvedinDemecolcineandCHX,theEnucleationMethodandinvitroMatu

6、rationTimesofPorcineOocytesonenucleationratearestudied.Andthedevelopmentofreconstructedembryosbynucleartransferwithearfibroblastscellontwodifferentenucleationmethodwasfurtherobserved.ThestudywasdesignedtoselecttheoptimumCBconcentrationwithphysicalenucleationmethod,thebestpre-activatorwithchemi

7、calone,therightenucleationtimewiththetwomethod,andpavethewayfortheapplicationoftheporcinesomaticcellnucleartransferwithDemecolcine-inducedenucleationmethod.IV1.EffectofCytochalasinBwithdifferentConcentrationonPorcineOocyteEnucleateInthe