Scriptaid对体细胞核移植猪胚胎发育的影响

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1、甘肃农业大学2017届硕士学位论文分类号密级UDC单位代码10733甘肃农业大学硕士学位论文Scriptaid对体细胞核移植猪胚胎发育的影响Effectofscriptaidonembryonicdevelopmentofsomaticcellnucleartransferswine卢富春论文指导老师史兆国教授（甘肃农业大学兰州730070）学位名称农业硕士专业领域养殖论文答辩日期2017年11月24日学位授予日期2017年12月答辩委员会主席滚双宝教授评阅人孙超教授孙世铎教授王自科高级畜牧师20

2、17年11月1甘肃农业大学2017届硕士学位论文EffectofscriptaidonembryonicdevelopmentofsomaticcellnucleartransferswineByLuFuchunAThesisSubmittedToGansuAgriculturalUniversityinPartialFulfilmentoftheRequirmentsForMasterDegreeSupervisor:Prof.ShiZhaoguoFacultyofAnimalSciencean

3、dTechnologyGansuAgriculturalUniversity,LanZhou,P.R.730070CompletedinOctober,2017CommencementinNovember,20172甘肃农业大学2017届硕士学位论文摘要体细胞核移植技术对于动物繁育、地方优良种质资源保存、濒危动物保护以及发育生物学基础理论研究等均具有重要意义，但目前体细胞核移植仍还存在克隆效率低、孕期流产率高、克隆胚胎发育能力差、出生后生长异常、供体和受体同步协调性不一致、克隆动物表型正常而实质异

4、常、理论和技术还很不成熟等问题，这些已成为制约这一技术应用和商业化推广的主要障碍，因此完善体细胞核移植技术体系，探明核移植技术机理乃是当前急需解决的难题。本研究致力于检测一种低毒新型的组蛋白去乙酰化酶抑制剂Scriptaid对体细胞核移植猪胚胎克隆效果的研究，在之前研究的高毒性组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素（TSA）的基础上，使用Scriptaid对体细胞克隆猪胚胎进行不同浓度和不同时间的处理，体外检测胚胎分裂率和发育能力。本试验以对照试验作为基础，以凌源禾丰种猪场长白猪胎儿成纤维作为供体细胞，

5、然后通过体细胞核移植（SCNT）技术获得体外发育胚胎，将重构胚胎用不同浓度（0，200，500，700和900nmol/L）Scriptaid处理后，并进行不同时间(0，15，36和72h)的培养，观察不同处理浓度和处理时间下胚胎在2细胞阶段卵裂率、桑椹胚率、囊胚率，同时通过Real-timePCR检测囊胚期对照组与Scriptaid处理组的Oct4，Sox2两个基因的相对表达变化。结果表明：与非处理组相比，用500nmol/LScriptaid处理核移植胚胎桑椹胚率和囊胚率最高，分别达到50%和

6、25.9%（P<0.05），各处理组间2细胞分裂率差异均不显著（P>0.05）；在不同处理时间上，用500nmol/LScriptaid处理15h后桑椹胚率和囊胚形成率最高，分别达到52%和27%（P<0.05），在处理72h后桑椹胚率显著低于0h处理（P<0.05），囊胚形成率呈现降低趋势（0.05

7、Sox2mRNA的表达差异不明显（0.05

8、硕士学位论文AbstractSomaticcellnucleartransplantation(SCNT)isapowerfultechniquewhichisbenefitforanimalreproductionandbreeding,localgermplasmresourcespreservation,extinctedanimalpreservationanditalsoplaysanimportantroleforthesolutionofmanybasicbiolog