《制备HPLC技术》PPT课件

《《制备HPLC技术》PPT课件》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、制备HPLC技术主要内容第一部分.制备HPLC概述第二部分.制备HPLC技术问题上样条件的选择馏分的收集循环色谱柱切换第一部分制备HPLC概述制备型液相色谱：结构与分析型一样，但泵流量大、进样量大、采用制备柱；柱后馏分收集器。制备HPLC概述制备HPLC概述—制备HPLC与分析HPLＣ比较目的填料流量流通池联系制备HPLC样品中特定成分的高纯度获取，大量、廉价的制备20μ以上为佳0.1-150ml/min最大允许流速可为150mL/min在进行制备HPLC之前，常先进行分析HPLC实验，对分析方法进行优化、放大应用到制备HPLC中，详见后。分析

2、HPLC定性分析：检测的灵敏度定量分析：分离度、再现性3-5μ0.001-9.999ml/min一般的分析池的最大允许流速仅为5mL/min，或者10mL/min制备HPLC概述—主要结构单元输液部:输液泵shimadzuLC-6AD(适用于分析-半制备,再循环半制备)分离部:制备柱内径20～50mm，柱长50cm。检测部:检测器shimadzuSPD-M10Avp馏分部:馏分收集器shimadzuFRC-10A制备HPLC概述—制备泵的耐压制备HPLC系统因制备柱的填料很细，分离度好，同时反压很高，整个系统对压力很敏感，制备泵要求能在制定的恒

3、流量下,克服100-150bars反压色谱柱的柱容量（柱负荷）对分析柱：不影响柱效时的最大进样量；对制备柱：不影响收集物纯度时的最大进样量；超载：进样量超过柱容量。柱效迅速下降，峰变宽。超载可提高制备效率，以柱效下降一半或容量因子k降低10%为宜。制备HPLC概述—柱容量制备HPLC概述—分离效能取决于分离速度、分辨率和上样量。对某一个分离参数进行优化常会影响到其他分离参数。增加洗脱液流速会降低分辨率，分辨率也会因上样量过大而下降。但分辨能力并不总是制备HPLC首要考虑的因素，制备型HPLC应首先具有经济、快速的生产所需产品的能力。分辨率速度

4、载样量制备HPLC概述—应用举例在许多分离工作中，需要从大量的物质中分离纯化不足１％的所需成分，这种分离工作十分困难，在纯化的最后阶段常需使用１０μm或更小颗粒的高效填料。为获得所需微量组分，可采用如下手段：制备型分离-半制备型分离-分析型分离-产物。制备HPLC有关技术问题第二部分制备HPLC技术问题—超量载样在分析液相中色谱柱的典型进样量是微克级，甚至更低。样品量和固定相之比有的甚至小于1：100000，进样体积一般来说都大大小于色谱柱体积（小于1：100)。在这种条件下，会达到很好的分离效果，峰形尖锐并且很对称。而在制备液相中，最大的区别

5、就是超量进样。制备HPLC采用超量进样的原因:大样品量的纯化方法分析系统的放大:使用直径更大的制备柱、更高的流速，根据色谱柱的长度增加进样量并保持样品浓度不变，峰形尖锐而对称。需大型的色谱柱和大量的溶剂来分离较少的样品，不经济色谱柱超量载样：相同的条件下超量进样浓缩法和体积超载法制备HPLC技术问题—超量载样浓缩法超量载样体积法超量载样提高样品的浓度，保持进样体积不变；取决于组分在流动相中的溶解度；生产效率决定于选择性；受固定相粒度大小的影响不大取决于进样体积，生产效率决定于制备柱直径，需要小颗粒填料。VS容量因子降低，峰形从高斯曲线变为三角形

6、峰高不变，峰变宽并呈矩形制备HPLC技术问题—超量载样注意!应尽可能选用流动相来溶解样品，但应注意样品在流动相中应有良好的溶解度。同时，若样品体积太大，分辨能力就会下降；若样品过浓，则可能在柱的顶部形成沉淀。尽管如此，为每次可分离得到更多的样品，还是应在小体积的流动相中溶解较多的样品。可将样品溶于不同于流动相的溶剂，但用此法时需很谨慎。制备HPLC技术问题—超量载样分析HPLC进样量远远小于柱子的载样极限,样品在柱子里的分配几乎是理想的,而制备通常都会对上样到一定的过载,主要组分的量在柱子里分配已经和分析情况很不相同,通常在增加到一定进样量后,

7、分离效果都会不同程度的变差！制备HPLC的首要问题是快速、高效的制备色谱纯的产品！！分离度在制备HPLC中并不是首先要关注的问题，色谱峰会比较难看！制备HPLC技术问题—样品的纯化在利用制备HPLC最终纯化步骤前做一些初步纯化是提高效率降低成本的优化措施.比如最终纯化通常有一定的分离难度,又希望有足够的收率,所以使用的仪器和填料可能是昂贵的.未经预纯化的样品,尤其是天然产物,含有大量的可能在填料表面不可逆吸附的组分,直接进样,可导致昂贵的填料很快失效.此外,大量的杂质降低对目标产物分离度,因此限制了进样量和生产效率.同时分别用正反相色谱去除前后

8、杂,比单用一种色谱得到目标产物更简单易行.总之,制备色谱尤其是工业色谱的目标不仅是找到技术上可行的方法,而且要综合考虑成本.制备HPLC技术问题—应用