《HPLC仪器装置》PPT课件.ppt

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1、Chapter7第三节仪器装置高效液相色谱仪组成流动相及贮液罐高压输液泵及梯度洗脱装置进样装置色谱柱检测器馏分收集器数据处理及色谱工作站流动相泵色谱柱检测器泵液分离检测记录进样阀进样一、流动相及贮液罐1.贮液罐材料应耐腐蚀，常用材料为玻璃、不锈钢或特种塑料（PEEK）。吸滤头吸滤头：多孔不锈钢过滤器，孔径0.45um。吸滤头贮液罐流动相需经过0.45um滤膜过滤，以除去微小颗粒，尤其是使用缓冲液。2.流动相脱气流动相中有溶解的气体，在洗脱过程中当流动相由色谱柱流至检测器时，因压力降低而产生气泡，从而影响检测器的工作。1）低压脱气法使用水泵连接抽滤瓶和微孔

2、玻璃漏斗，可完成脱气和过滤的双重任务。3）超声波脱气法将流动相瓶置于超声波清洗器中，以水为介质超声脱气。2）吹氦脱气法将氦气通入流动相以驱除其中的空气，适用于所有的溶剂。4）真空脱气法-在线脱气打开真空脱气机的电源开关后，控制电路即开启真空泵，真空泵运行使真空箱内产生部分真空。真空度由压力传感器测定。根据传感器信号，真空脱气机通过运行或关闭真空泵来维持真空度流动相泵色谱柱检测器泵液分离检测记录进样阀进样仪器装置二、高压输液泵及梯度洗脱装置1.要求1）耐化学（酸、碱）腐蚀；2）输出流量稳定，重复性高；3）能在高压下连续工作；5）易清洗、维修，具有梯度洗脱功

3、能力。4）输出流量范围宽分析柱：0.1～10ml/min2.分类恒流泵恒压泵注射泵往复柱塞泵液压隔膜泵气动放大泵3.往复型泵1）原理2）优点：体积小，流量调节方便，更换溶剂容易3）缺点：对加工制造有特殊要求：耐磨损输出压力有明显的起伏脉动。4）减小脉动措施①采用多头泵交替联动A双柱塞并联泵B双柱塞串连泵4.梯度洗脱问题：样品组成复杂，第一个组分的k’值和最后一个峰的k’值相差几十倍至上百倍。解决：程序升温？流量程序？在一个分析周期中，不断改变流动相的组成，先用洗脱能力弱的溶剂，然后不断增加洗脱能力强的溶剂的组成，使各个组分能在最佳条件下得到洗脱。1）定义

4、(gradientelution)：2）梯度洗脱装置A、低压梯度（泵前混合)B、高压梯度（泵后混合)三、进样装置柱外展宽是指色谱柱外的因素所引起的峰展宽，主要包括进样系统、连接管道及检测器中存在死体积。分柱前和柱后展宽。进样系统是引起柱前展宽的主要因素，因此高效液相色谱法中对进样系统要求较严。1、自动进样器进样2.六通阀进样美国Rheodyne公司的六通阀进样器最为通用，各大HPLC仪器制造商均以此产品作为仪器的进样器。开始分析废液样品淋洗液至分离柱进样阀样品装样废液淋洗液至分离柱（ＬＯＡＤ）（ＩＮＪＥＣＴ）样品环112233445566*手柄处于Loa

5、d和Inject之间时，由于暂时堵住了流路，流路中压力骤增，再转到进样位，过高的压力在柱头上引起损坏，所以应尽快转动阀，不能停留在中途。*在HPLC系统中使用的注射器针头有别于气相色谱，是平头注射器。一方面，针头外侧紧贴进样器密封管内侧，密封性能好，不漏液，不引入空气；另一方面，也防止了针头刺坏密封组件及定子。1)部分装液法:进样量最多为定量环体积的75％，并且要求每次进样体积准确、相同2)完全装液法:进样量最少为定量环体积的3至5倍，这样才能完全置换样品定量环内残留的溶液，达到所要求的精密度及重现性。六通阀进样器的进样方式四、色谱柱色谱柱长：100mm

6、-250mm色谱柱内径：4.6mm，2.1mm色谱柱填装：匀浆装柱馏分收集器用微处理机控制，按预先规定好的程序，或按时间，或按色谱峰的起落信号逐一收集和重复多次收集。数据处理及色谱工作站通用型和专用型通用型工作站包括软件、数据采集装置和接口，可用于不同型号的仪器，具有数据采集、校正、计算、绘图、贮存、管理等功能，能完成一般仪器系统测试，计算工作曲线和样品含量、绘制色谱图等。专用型是指为一定型号仪器配套的工作站，大都包括了仪器参数的自动控制功能，一般功能较强，如能贮存和履行梯度洗脱程序和自动进样程序，进行各种数据校正高效液相色谱法与经典液相色谱法的比较