康氏木霉内切β葡聚糖苷酶的分离纯化及酶学性质

《康氏木霉内切β葡聚糖苷酶的分离纯化及酶学性质》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、2014硕士学位硕论文士论文康康氏木霉内切β-葡聚糖苷酶的康氏氏木木霉霉分离纯化及酶学性质内分内切β离切β--葡纯葡聚聚糖化苷论士硕论士及糖酶文文苷的酶酶分的离学分纯离化性纯张静茹及酶质化及学性酶学质性质2014二○一四年五月分类号密级UDC硕士学位论文康氏木霉内切β-葡聚糖苷酶的分离纯化及酶学性质张静茹学科专业生物化工指导教师覃益民副教授论文答辩日期2014.05.26学位授予日期答辩委员会主席I广西大学学位论文原创性和使用授权声明本人声明所呈交的论文，是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除已特别加

2、以标注和致谢的地方外，论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的研究成果，也不包含本人或他人为获得广西大学或其它单位的学位而使用过的材料。与我一同工作的同事对本论文的研究工作所做的贡献均已在论文中作了明确说明。本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品，知识产权归属广西大学。本人授权广西大学拥有学位论文的部分使用权，即：学校有权保存并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学

3、位论文。本学位论文属于：□保密，在年解密后适用授权。□不保密。(请在以上相应方框内打―√‖)论文作者签名：日期：指导教师签名：日期作者联系电话：电子邮箱：II康氏木霉内切β-葡聚糖苷酶的分离纯化及酶学性质摘要纤维素的资源化利用很大程度上取决于高效的纤维素酶，因此开展纤维素酶的分离纯化和酶学性质研究，对于促进纤维素的资源化利用具有重要意义。本文是关于康氏木霉纤维素酶系中内切β-葡聚糖苷酶的分离纯化及其酶学性质的研究。通过硫酸铵分级沉淀、SephacrylS-200HR凝胶过滤层析、DEAESepharoseFF离子交

4、换层析及OctrlSeparoseCL-4B疏水层析等分离技术，从康氏木霉GIMP3.444液态发酵5d的发酵粗酶液中分离纯化得到一种电泳纯的内切β-葡聚糖苷酶，SDS-PAGE电泳分析表明该内切酶的相对分子量为61.8kDa。-1纯化的内切β-葡聚糖苷酶的比酶活力为24.91IU·mg，相对于粗酶液纯化了7.55倍，回收率为3.72%。酶学性质研究表明：该内切β-葡聚糖苷酶的最适反应温度为55℃，60℃以下具有较好的热稳定性，最适pH为4.4，在pH3.2~6.2范围内具有较好酸碱稳定性，最佳pH稳定范围为4.4

5、~5.0，作用于羧甲基纤维素钠时，-1Lineweaver-Burk法求得Km、Vmax分别为4.81mg·mL、2.48-1mg·(min·mL)。不同的金属离子对内切β-葡聚糖苷酶活性具有不同2+程度的抑制作用，其中Mn对内切β-葡聚糖苷酶活性的抑制作用最明显。本文还综合考虑pH对底物CMC-Na解离的影响和产物葡萄糖对III内切β-葡聚糖苷酶的抑制，在不同pH下测定Km’、Vmax’，验证pH对内切β-葡聚糖苷酶活性影响的动力学模型，结果实验所得最佳pH与模型计算所得pH相符。关键词：康氏木霉内切β-葡聚糖苷

6、酶分离纯化酶学性质动力学IVPUIFICATIONANDCHARACTERIZATIONOFANENGO-β-GLUCANASEFROMTRICHODERMAKONINGIIABSTRACTCelluloseutilizationdependslargelyonefficientcellulase,andthereforetocarryouttheseparation,purificationandcharacterizationofcellulaseenzyme,forthepromotionofresource

7、utilizationofcelluloseisimportant.Anendo-β-glucanasewaspurifiedbymethodsofammoniumsulfateprecipitation,SephacrylS-200HRgelfiltrationchromatography,DEAESepharoseFFionexchangechromatographyandOctrlSeparoseCL-4Bhydrophobicinteractionchromatographyfromtheculturefi

8、ltrateofTrichodermakoningiiGIMP3.444.Themolecularweightoftheenzyme,whichwasidentifiedasasinglebandbySDS-PAGE,is61.8kDadeterminedbygelimagingsystem。Thefinalpurifiedfold,specific-1ac