表达鹅细小病毒VP3基因重组禽痘病毒的构建

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1、东北农业大学硕士学位论文表达鹅细小病毒VP3基因重组禽痘病毒的构建姓名：赵丽荣申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：王君伟2003.6.1摘要—簟-墨田墨_—_l___——_—曾鼍皇-————___—昔——_瞳_墨墨-量___-__—l——-—_____IIII要鹅细小病毒(GooseParvovirus，GPV)为小鹅瘟的病原体。小鹅瘟主要发生于1月龄内雏鹅和雏番鸭，是以急性肠炎及肝、肾、心实质脏器炎症为特征的烈性传染病，对养鹅业发展造成很大威胁。自1956年我国学者方定一首次发现并分离到GPV后，国外相继也有分离到该病毒的报道，说明该病毒在世

2、界范围内有较为广泛的流行。，目前，对GPV的防制主要是靠疫苗接种。传统疫苗对GPV的预防和控制起到了一定的积极作用，但同时灭活苗存在生产成本高，注射局部炎症反应较强等弊端，弱毒苗又易发生毒力返强等。GPV主要免疫原性蛋白VP3的高度保守性给新型疫苗及分子诊断试剂的研制提供了思路。本研究采用脂质体转染方法，将含有完整GPVH1分离株VP3基因、报告基因LacZ、禽痘病毒早／晚期启动子LP2EP2、痘苗病毒启动子P7．5、P1I和FPV一017复制非必须区的转移载体质粒psY681VP3Lacz与FPV一017共转染鸡胚成纤维细胞，经6轮蚀斑克隆、筛选、表

3、达，PCR鉴定和Dot—ELISA检测，证明该重组病毒已构建成功，并获得了遗传性状稳定的鹅细小病毒VP3基因的重组禽痘病毒。为新型基因工程疫苗的研制奠定了科学的基础，同时也为我国高致病力鹅细小病毒病的防治提供了物质准备f1关键词鹅细小病毒：VP3基因：重组禽痘病毒ConstructionofRecombinantFlowpoxvirusExpressingVP3GeneofGooseParvovirusAbstractGooseParvovirus(GPV)isthepathogenofGoslingsplague．Thisdiseaseishighl

4、yfataltogoslingsandmuscovyducklingsunder1monthofagewiththecharacteristicsofacuteenteritisandhepatonephrieandmyocardiumlesions，havingmadelargelOSSeStogoosebreedingindustry．InmanycountriesthevirushasbeenisolatedafterDingYi．Ffirstlyfoundandisolateditinchina,whichsuggestedthatthisdi

5、seasehasbeenprevalentintheworld．Sofaras．preventionofGPVinfectionmainlydependedonvaccinesAlthoughthetraditionalvaccineshaveplayedactiveroleinpreventionandcontrollingthedisease，manydeficienciesexiststillsuchasinactivatedvaccinebeingexpensiveandinducingstronglyresponseattheinjected

6、tissue，aswellastherecoveryoftheattenuatedvaccine．ThehighconservativemainantigenicproteinVP3ofGPVprovidedtheaccesstoproducingthenewtypevaccinesanddiagnosticagent．Inthisstudy,therecombinantfowl—poxvimswastransfectedintoexpressingtheVP3geneofisolatedGPVHIstrainintotheCEFcellswithFP

7、V·017byliposome，whichhavetheLacZreportergene，earlier／latterpromotersLP2EP2ofFPV，promotersP7．5andP7．1ofVacciniavirus，replicationunnecessaryregionofFPV-017．Following6cyclesscreenings，clonings，purificationofblueplaques，detectionofPCRandDot-ELISA，whichverifiedthegeneticstableVP3一fow

8、lpoxvirusrecombinantconstructedSUCCESSfully．Thi