拟除虫菊酯类噬菌体抗体库的构建和筛选

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1、分类号：Q787密级：(秘密、机密、绝密)学校代码：10057研究生学号：08813003拟除虫菊酯类噬菌体抗体库的构建和筛选ConstructionandScreeningofscFvPhageDisplayAntibodyLibrarySpecificforPyrethroid专业名称：食品营养与卫生学指导教师姓名：王硕教授研究生姓名：刘昕煜申请学位级别：医学硕士论文提交日期：2010年12月论文课题来源：国家自然科学基金学位授予单位：天津科技大学天津科技大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究工作所取

2、得的成果。除文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包括任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果内容，也不包括为获得天津科技大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：诜＼归饥哏皂日期：飞力I『年弓月Iy日知识产权和专利权保护声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师具体指导下并得到相关研究经费支持下完成的，其数据和研究成果归属于导师和作者本人，知识产权单位属天津科技大学；所涉及的创造性发明的专利权及使用权完全归天津科技大学所有。本人保

3、证毕业后，以本论文数据和资料发表论文或使用论文工作成果时署名第一单位仍然为天津科技大学。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：iInHLfJ乏同期：伽I1年、月IV同学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，同意公布论文的全部或部分内容，允许论文被查阅和借阅。本人授权天津科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密Il(请在方框内打“、／”)，在年解密后适用本

4、授权书。本学位论文属于不保密l√(请在方框内打“、／”)。作者签名：蕾I怕弋屹日期：们ff年弓月I≯同刷磁狡弘Z嗍：伽II¨用垆同摘要拟除虫菊酯类农药的广泛使用导致了其在水体、茶叶、豆乳制品等多种经济作物中的残留，引起了人们的广泛重视，因此对拟除虫菊酯类农药的检测对于保障食品安全具有重要的意义。目前常用的仪器操作过程耗时、耗力，极大的影响了它们的实用性，导致市场监测滞后现象的发生。由于具有易操作，前处理过程简单，成本低，检测快速、准确、灵敏，可实现高通量、自动化检测等优点，免疫分机方法作为一种较为先进的小分子物质检测方法被广泛使用。在免疫分析中，

5、抗体是决定这一方法灵敏度与特异性的关键因素。其中基因工程抗体是一种较为先进的抗体形式，具有分子量小、氨基酸组成清楚、便于基因改造、可大量制备、相对成本较低等优势，已经成为免疫分析方法的重点研究内容。本研究从实验室保存的特异性较高的拟除虫菊酯单抗细胞中提取总RNA，通过RT-PCR获得cDNA，利用兼并引物PCR扩增获得长度约为400bp的轻链可变区片段和重链可变区基因片段，重叠延伸PCR获得长度约为780bp的单链抗体基因片段。将该片段胶回收纯化后，使用限制性内切酶EcoRI和HindIII进行双酶切，与T7噬菌体臂连接并包装后，成功构建拟除虫菊

6、酯特异性的噬菌体抗体库。经测定，拟除虫菊酯原始噬菌体抗体库的滴度为2．67x105pfu，对噬菌体克隆随机PCR结果显示，抗体库的阳性率为81％。以人工合成的拟除虫菊酯一OVA为包被原对抗体库进行淘选，经过4轮淘选富集获得特异性的噬菌体克隆。随机选取4个阳性克隆进行序列测定，结果显示拟除虫菊酯类单链可变区基因中重链可变区由119个氨基酸构成、轻链可变区由108个氨基酸构成。本研究的丌展，为拟除虫菊酯新型抗体的制备及其免疫检测方法的技术进步奠定了基础。关键词：拟除虫菊酯：噬菌体展示；重组抗体AbstractThewidespreaduseofpyr

7、ethroidinsecticidesledtotheresidueinwater,teaandalotofeconomiccrops．Andpeoplehavepaidmoreattentiontoit．Sothedetectionofpyrethroidinsecticideshasimportantsignificanceinfoodsafety．Currentlytheinstrumentoperationshavetime-consumingandlabor-intensiveshortcomings，whichmakeflgreati

8、mpactontheirpracticability，resultingintheoccurrenceofhysteresisinthe