猪Pit1基因分子遗传多态性研究

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1、中国农业科学研究院硕士学位论文猪Pit-1基因分子遗传多态性研究姓名：庞瑾申请学位级别：硕士专业：动物遗传育种与繁殖指导教师：郑友民20040501猪Pit一1基因分子遗传多态性研究摘要催乳素(Prolactin，PRL)、生陡激素(GrowthHormone，GH)、促甲状腺素(Thyroid—stimulatingIIormone，TStt)是动物垂体前叶分泌的具有重要生理功能的激素。而垂体特异性转录因子(Pituitary．SpecificTranscriptionFactor)Pit-1则是动物垂体前叶特异表达的一种具有重要功能的转

2、录因子，它与垂体中PRL基因、GH基因、TSH基因以及Pit-I自身的启动子结合，调控这些基因的转录和表达，从而影响动物的生长、发育和繁殖。本研究的目的是通过分子生物技术手段，寻找猪Pit，1基因序列中的多态位点，为后续深入研究提供理论依据。试验选用北京黑猪、沂蒙黑猪、莱芜猪、巴马小型猪、滇南小耳猪、五指山猪、香猪7个中国地方猪品种以及英系大白猪、长白猪、法系大白猪、杜洛克4个国外引入品种(系)共I1个试验动物群体508头个体。采用PCR—SSCP和PCR-RFLP分析方法研究猪Pit-1基因的遗传变异，研究结果如下：1．应用PCR．SSC

3、P技术，利用引物PI，在7个中国地方猪种Pit-1基因第4外显子上发现了一个突变位点。序列测定结果表明，其单核苷酸变异是由碱基c—T的替换造成的，但并没有导致编码氨基酸的改变，均编码组氨酸。对7个中国地方猪群体其计347头个体的基因型进行了检测与统计分析，HaZy．Weinberg平衡适台性检验结果表明：在这7个群体中，沂蒙黑猪、巴马小型猪群体的基因频率和基因型频率都处于平衡状态(P>O．05)，而北京黑猪、莱芜猪、滇南小耳猪、五指山猪、香猪群体则未达到平衡状态(P<0．05)；另由多态信息含量(PIC)值的计算可知此基因座位在莱芜猪和五指

4、山猪群体中多态性不高．遗传变异不大，而在北京黑猪、沂蒙黑猪、巴马小型猪、滇南小耳猪和香猪群体中则呈现中度多态。2．应用PCR-RFLP技术，利用引物P3，在4个国外引入猪种(系)Pit-I基因的包含部分内含子4、全部外显子5、内含子5、外显子6及部分3’侧翼的1747bp的扩增片段中检测到多个突变位点，并验证了一个Rsal．RFLP多态位点，在此位点上产生了A、B两个等位基因。测序分析表明：其多态性的产生是由于第542位碱基G—c的替代造成的。该切点存在时产生的片段为等位基因A，消失时产生的片段为等位基因B。在英系大白猪、长白猪、法系大白猪

5、、杜洛克4个国外引入品种(系)群体共计161头个体中分析了此突变位点的基因型情况，Hardy．Weinberg平衡适合性检验结果表明：英系大自猪和杜洛克猪群体处于平衡状态(P>0．05)，而长白猪和法系大白猪群体未处于平衡状态(P<0．05)；另由多态信息含量(PIC)值的计算可见，4个国外引入I口1种(系)猪群体均处于中度多态，说明此基因座位在这4个国外引入品种(系)猪群体中多态性高，遗传变异大。同时，经过预测，发现其中的一个SNP可能使猪内含子5中山现了新的转录因子结台位点。3．利用引物P。成功地克隆山猪Pit-1基因的部分外显子3及全

6、部内含子3的序列。从而为猪Pit-1基因的进一步研究奠定了基础。本试验在Pit．1基因已知序列中检测到的突变可以进一步与生产性状相结合，进行更深入地研究。而所克隆的猪Pit-l基因部分外显子3及全部内含子3的序列则可被用作探针，通过构建基因组DNA文库，筛选猪Pit-1基因的全序列以及调控区的信息。此外。该段序列的克隆还为进一步寻求基因内的遗传学变异提供了基础。关键词：猪，Pit．1基因，PCR．SSCP，PCR．RFLP，序列克隆AnalysisofmolecularpolymorphismsofporcinePit一1geneAbstr

7、actProlactin(PRL)，GrowthHormono(GH)andThyriod·StimulatingHormone(TSH)，secretingbyanimals’anteriorpituitary,areessentialhormonesinphysiology．Pituitary—SpecificTranscriptionFactor(Pit一1)isoneoftheimportanttranscriptionfactorsofGH，PRLandTSHgene．Pit一1playsanimportantroleinanim

8、als’growth，developmentandreproductionviaregulatingtheexpressionofthesegenes．Tilepurposeof