糜酶抑制剂对肺纤维化干预作用的实验研究

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1、江苏大学硕士学位论文摘要目的观察用糜酶抑制剂(chymaLseiI蚰bitor，chy—I)对博莱霉素(bleonlycin，BLM)致大鼠肺纤维化模型干预作用，对糜酶、转化生长因子．Bl、I型胶原、Ⅲ型胶原、血管紧张素II及其受体ATl的影响，以探讨肺纤维化的发病机制。方法健康sD雌性大鼠60只随机分三组：正常对照组(生理盐水)、模型组(博莱霉素)、干预组(博莱霉素+糜酶抑制剂)。分别在第7天，第14天，第2l天和第28天处死，每组检测5只大鼠髓染色观察支气管肺组织病理改变，支气管肺泡灌洗液(bronch02Llveolarlavag

2、enuid，BALF)白细胞计数及分类，用逆转录．聚合酶链式反应RT-PCR方法测肺组织糜酶和转化生长因子．Bl(TGF．B1)n删A表达的含量。酶联免疫吸附法(E玎z肿e．1iIll(edIInmuIloSorbentAssay，ELISA)检测BALF中转化生长因子．Bl(TGF．01)含量，免疫组化观察肺组织中TGF．pl、I型胶原、Ⅲ型胶原、血管紧张素H及其受体ATl蛋白的表达。结果(1)肺泡炎程度评价：干预组和模型组比对照组肺泡炎程度明显加重，有显著的统计学差异，但干预组和模型组之间无明显的统计学差异。(2)肺纤维化程度评价：

3、干预组和模型组比对照组纤维化明显加重，有显著统计学差异，且干预组比模型组明显的减轻，有显著的统计学差异。(3)BALF细胞计数和细胞分类：干预组和模型组大鼠的BALF中白细胞总数、巨噬细胞、中性粒细胞及淋巴细胞构成比较对照组有显著统计学差异，干预组的中性粒细胞与模型组在第7和14天干预组比对照组减少，有显著的统计学差异。(4)糜酶、TGF．Bl的II瓜NA分析：模型组和干预组肺组织中糜酶、TGF．Dl的mRNA的表达持续增强，与对照组有显著的统计学意义，干预组比模型组表达显著减少，有统计学差异。(5)TGF．B1蛋白表达分析：模型组BA

4、LF和肺组织中TGF．B1蛋白表达持续增强，干预组均明显减少，有统计学差异。江苏大学硕士学位论文(6)I型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达分析：模型组肺组织中I型胶原和Ⅲ型胶原蛋白均表达持续增强，干预组均显著减少，有统计学差异。(7)血管紧张素II及其受体ATl蛋白表达分析：模型组肺间质中血管紧张素II及其受体均表达持续增强，干预组均明显减少，有统计学差异。结论糜酶抑制剂能减轻博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化，可能是通过下调TGF．Bl、I型胶原、Ⅲ型胶原、血管紧张素II及其1型受体(ATl)的表达而发挥作用。[关键词]肺纤维化；糜酶；转化生长因子．B

5、l；I型胶原；Ⅲ型胶原；血管紧张素IIII江苏大学硕士学位论文ABSTRACTobjec伽e：To咖dythee恐ctofch肿aSe劬ibitoronbleomyc洫一inducedpuhnonaryfibrosisi11ratsand血spossiblenlechanism．Methods：Sixtyf．eI曲la龟ererandomlydividedin协threegroups：memodelgroup，t11ecomr01groupaIldchymaSem11ibitortI’eatment孕Dup，inwmchtlle鞠_ts

6、were砷勰traCheallyiIlstilled嘶t11(5mg瓜g)bleoInycin．FromthefirstdayaRerbleoInycinchallenge，byeVe巧day，thechymaSei11llibitor仃ea恤entgroupwaSperfbedintostomachdajlycllymaSeiIlllibitor(10mg／l(g)，t11eothergroupweregiVensterilesaline．FiVerats、Ⅳerel【illedeachgrouprespectivelyatt11et

7、hneoft11eseVenthda弘thefouneenlhday，恤twen锣-firStdayandthetwenty-eigh_c11dayThepa_Ⅱ10logicalchangesofluIlgtissuebyhematoxyliIl-eosiIl蚓n啦wereinVestigated．Thetotalanddi位rentwllitebloodcells，11lemRNAeXpressionofchymaSe，TGF-BlinpulmorlaIytissue、№re锄myzedbyusingthereVersal仃锄scr

8、iption．polymeraLsechainreaCtionl(RT-PCR)．，Iklevelofnansf．o砌血ggrowIllf．aCtor-p1(TGF-p1)i11thebronchoalVe