嗅黏膜间充质干细胞联合免疫抑制剂治疗阿尔茨海默病大鼠模型的研究

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1、硕士学位论文嗅黏膜间充质干细胞联合免疫抑制剂治疗阿尔茨海默病大鼠模型的研究学科专业外科学学位类型临床医学硕士专业学位研究生姓名Ａｆ导师姓名、职称彭立辉主任医师论文编号Ｓ１８０４９１８湖南师范大学学位评定委员会办公室二〇一八年六月分类号密级学校代码１０５４２学号２０１５７０２１０９２３嗅黏膜间充质干细胞联合免疫抑制剂治疗阿尔茨海默病大鼠模型的研究Ｓｔｕｄｙｏｆｏｌｆａｃｔｏｒｍｅｓｅｎｃｈｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓｙｙｃｏｍｂｉｎ

2、ｅｄｗｉｔｈｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅａｇｅｎｔｓ，ｉｎｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＡｌｚｈｅｉｍｅｒｓｄｉｓｅａｓｅｍｏｄｅｌｉｎｒａｔｓ研究生姓名曾武指导教师姓名、职称彭立辉主任医师学科专业外科学研究方向神经外科湖南师范大学学位评定委员会办公室二〇一八年六月嗅粘膜间充质干细胞联合免疫抑制剂治疗阿尔茨海默病大鼠模型的研究摘要目的：建立ＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙ（ＳＤ）大鼠嗅黏膜间充质干细胞一（ＯＭ－ＭＳＣｓ）的获取、

3、分离、培养方法，进步研宄其生物学特性。探讨ＯＭ－ＭＳＣｓ联合免疫抑制剂（马替麦考酚脂）治疗对阿尔茨海默（ＡＤ）模型鼠的影响－ＭＳＣｓ联病，验证ＯＭ合免疫抑制剂移植治疗ＡＤ的疗效及相关机制。－ＭＳＣｓ方法：（１）通过ＳＤ大鼠嗅黏膜贴壁法体外分离、培养ＯＭ，光镜下细胞形态学观察，用免疫荧光技术检测间充质干细胞和神经干，细胞标记物用流式细胞术检测细胞表面标记物，再诱导其向骨组织及脂肪组织方向分化，最后对其进行细胞周期检测及分析。（２）建立ＡＤ大鼠模型，再将实验分为五组分别进行干预：空白对照组，

4、生－ＭＳＣｓ组－理盐水组、ＯＭ、免疫抑制剂组（马替麦考酚脂）及ＯＭＭＳＣｓ。干预后通过Ｍｏ联合免疫抑制剂组ｒｒｉｓ水迷宫检测ＳＤ大鼠模型平均逃避潜伏期及穿过平台次数来评定其学习、记忆功能的改善；采用免疫荧光技术首先对移植后脑内的ＯＭ－ＭＳＣｓ进行ＢｒｄＵ荧光染色检测，再对干预后各组海马区神经细胞变性、坏死情况进行ＨＥ染色，同时对海马区Ａｐ－淀粉样蛋白沉淀进行硫黄素荧光染色最后用酶联；免疫吸附实验检测外周血中炎性因子（ＩＬ－６）与脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）浓度差异。Ｉ硕士学位论

5、文结果－ＭＳＣｓ：（１）分离培养的ＯＭ光镜下以梭形与多角形细胞为主－ＭＳＣｓ同，呈放射状排列，且生长旺盛；免疫荧光染色显示ＯＭ－１－ＣＤ１９时表达ＳＴＲＯ和Ｎｅｓｔｉｎ；第４代ＯＭＭＳＣｓ不表达、ＣＤ３１、－ＤＲＣＤ９０ＣＤ３４、ＣＤ４５及ＨＬＡ细胞表面标记物、ＣＤ１０５，但表达ＯＭ－ＭＳＣ基质细胞标记物；ｓ经成骨、成脂诱导后，茜素红染色和油红０染色均呈阳性细胞周期分析显示ＯＭ－ＭＳＣｓ符合干细胞生长；的特性。（２）ＡＤ模型鼠分别进行１个月干预后，免疫抑制剂联合ＯＭ

6、－ＭＳＣｓ组在定位航行实验中较其他４组找到平台的潜伏期最短；在空间探索实验中，联合组穿越平台的次数比其他组要多；干预４５ＢｒｄＵ的ＯＭ－ＭＳＣｓＨＥ染色可见联合组天后海马区可检测到标记了；的神细胞排列最整齐，且变性，坏死的细胞显著减少；干预４５天后硫磺素染色显示联合组ＡＤ大鼠海马区病理切片ＡＰ淀粉样蛋白沉积形成的老年斑较其余四组减少最明显４５ｄ后ＩＬ－６与；实验各组干预ＢＤＮＦ在血清中的浓度结果显示ＯＭ－－６浓度明显ＭＳＣｓ组的ＩＬ，：下调且ＢＤＮＦ浓度显著上调－。而联合组较其余４组ＩＬ

7、６下降幅度最大，且ＢＤＮＦ上升最明显。－ＭＳＣｓ组织块贴壁法获取容易结论：（１）ＳＤ大鼠ＯＭ，操作简单，且可大量扩增用于动物实验研宄，其在体外特定条件的诱导下可以多方向分化。ＳＤ大鼠嗅黏膜组织，且具有其他间充质干细胞相关特性块贴壁法为组织细胞工程研宄提供了充足的种子细胞来源。（２）ＯＭ－ＭＳＣｓ移植及免疫抑制剂均能改善病变区域的微环境，同时能够－减少海马区ＡＰ淀粉样蛋白斑块的量，两者联合应用比单独使用效果ＩＩ嗅粘膜间充质干细胞联合免疫抑制剂治疗阿尔茨海默病大鼠模型的研宄ＯＭ

8、－ＭＳＣｓ更佳。（３）移植联合免疫抑制剂治疗ＡＤ大鼠对其学习与记忆功能的改善比单独移植ＯＭ－ＭＳＣｓ组及单独使用免疫抑制剂组疗效更为显著－ＭＳＣｓ与免疫抑制剂联合治疗ＡＤ模型鼠，说明ＯＭ的疗效具有协同作用。关键词：阿尔茨海默病，嗅黏膜间充质干细胞，免疫抑制剂，动物模型，移植ＩＩＩ嗅粘膜间充质干细胞联合