宠物皮肤致病菌抗菌肽的筛选及纳米乳的制备

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1、分类号：Q38;Q291单位代码：10183研究生学号：2015882015密级：公开宠物皮肤致病吉林大学菌抗菌硕士学位论文肽的筛（学术学位）选及宠物皮肤致病菌抗菌肽的筛选及纳米乳的制备纳米乳ScreeningofAntibacterialPeptidesagainstPetSkinPathogens的制andthePreparationofNanoemulsion备作者姓名：张瑜张瑜专业：生物化学与分子生物学研究方向：生物制药吉林指导教师：刘松财教授大学培养单位：动物科学学院2018年6月宠物皮肤致病菌抗菌肽的筛选及纳米乳的制备ScreeningofAntibacte

2、rialPeptidesagainstPetSkinPathogensandthePreparationofNanoemulsion作者姓名：张瑜专业名称：生物化学与分子生物学指导教师：刘松财教授学位类别：理学硕士答辩日期：2018年6月4日中文摘要宠物皮肤致病菌抗菌肽的筛选及纳米乳的制备近年来，宠物饲养数量不断增加，宠物疾病也随之而来，特别是犬猫细菌性、真菌性和混合性皮肤病在兽医临床疾病中占有较大的比例，临床上耐多种抗生素的耐药菌株大量产生。抗菌肽在近年来成为抗生素的替代药物，具有高效的、广谱的抗细菌、真菌、病毒和一些原虫等活性，且氨基酸序列较短，合成简便。临床用药上

3、为优化抗菌肽的作用，增加稳定性与安全性，我们筛选短序列抗菌肽应用于纳米给药系统，增加其透皮吸收性，并对其稳定性，安全性和体外抗菌性进行了研究。本实验通过纸片扩散法药敏实验对多种化学固相合成法合成的抗菌肽进行抑菌活性检测，以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为代表菌株，初步筛选出抗菌肽RR-9、RI-12具有理想的抗菌活性。进一步通过最小抑菌浓度（MIC）检测、杀菌浓度检测、杀菌曲线测定、扫描电镜和透射电镜进行验证，结果表明：RR-9、RI-12两种抗菌肽均能同时抑制宠物皮肤常见致病菌标准株的生长，对金黄色葡萄球菌ATCC29213的MIC值分别为16µg/mL和6.6µg/mL。

4、RR-9对临床耐药金黄色葡萄球菌的MIC值为64µg/mL。当RR-9浓度达到4倍MIC值时，可在20分钟内完全杀死金黄色葡萄球菌。电镜结果显示抗菌肽RR-9可快速破坏细菌细胞膜的完整结构，通过使细胞膜破碎、内容物质外流，从而抑制细菌生长，达到杀菌目的。本实验采用已报道配方：肉豆蔻酸异丙酯（IPM）作为油相，辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯（EP）作为表面活性剂，聚甘油脂肪酸酯作为助表面活性剂，在此基础上筛选油酸、氮酮最佳比例增加纳米乳稳定性与皮肤渗透性，以此配方制备含有RR-9的抗菌肽纳米乳，并对其进行质量评价，利用紫外分光光度计法建立纳米乳中抗菌肽含量测定方法。实验结果显示油

5、酸和氮酮的最佳比例为1%和2%。粒度分析仪检测得出纳米乳平均粒径为95.3nm，大小均一，分布均匀。建立的含量检测方法简便易行，准确性高。本研究采用大鼠、家兔的皮肤刺激性实验、急性毒性实验和HaCaT细胞毒性实验考察了包含RR-9的纳米乳的安全性，并且对抗菌肽纳米乳的体外药效进I行了评价。结果显示，该抗菌肽纳米乳制剂经皮肤外用未出现急性毒性反应、刺激性反应、过敏性反应，细胞增殖度RGR为61.54%，毒性为2级，无细胞毒性。体外药效实验表明该抗菌肽纳米乳对金黄色葡萄球菌ATCC29213及白色念珠菌ATCC10231的MIC值均为3.9µg/mL，对抗生素抑菌效果较差的

6、耐药金黄色葡萄球菌的MIC值为7.8µg/mL，由此可见包含RR-9的纳米乳抑菌活性优于抗菌肽水溶液。关键词：宠物皮肤病，抗菌肽，抑菌活性，纳米乳IIAbstractScreeningofAntibacterialPeptidesagainstPetSkinPathogensandthePreparationofNanoemulsionInrecentyears,thenumberofpetskeptgrowingandpetdiseaseshavefollowed.Inparticular,Caninecatbacteria,fungalandmixedskindis

7、easesaccountforalargeproportionofveterinaryclinicaldiseases.Therefore,alargenumberofclinicallyresistantstrainsresistanttomultipleantibiotics.Antimicrobialpeptideshavebecomeanalternativetoantibioticsinrecentyears.Theyhaveanefficient,broad-spectrumactivityagainstbacteria,fu