加压毛细管电色谱仪的

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1、加压毛细管电色谱仪的原理及应用CapillaryElectrochromatographyAdvancesandApplications分子生物研究中心主讲人:李少伟CEC基本原理1微型分离技术2micro-HPLC和CE的结合3电渗流(EOF)为流动向的推动力4二维分离机理：液相色谱和电泳之和（分配和电泳淌度）用途:分析生物活性肽中草药多糖等的成分分析.建立中草药的指纹图谱.药品的质量监控.结合高电压系统可提高分析效率.并使图谱更清晰明了.图形分析:黑色代表普通HPLC的血清肽图谱.粉色代表加-10KV电压后血清肽图谱.黄色代表加+20KV电压后血清肽图谱.说明分析:加负电压后血清肽的

2、出峰时间向后延迟,加正电压后出峰时间向前平移.表明血清肽合流动相后显负电性.样本在淌度和电压共同作用下谱图有变化.可以发现更多成分.同时提高分离效率.因为同一成分在流动相相同的情况下只是淌度不同.现在加了高电压.使以前需很长时间才能出现的峰现在只需很短时间就可出现.黑色代表普通HPLC的脾肽图谱.蓝色代表加-5KV电压后脾肽图谱.粉色代表加-10KV电压后脾肽图谱.黄色代表加-15KV电压后脾肽图谱.出峰时间从5.6分提前到了3.4分.效率几乎底稿50%.而且各主要成分均完美再现.没有漏掉主要的峰.TriSepTM-2100加压毛细管电色谱仪操作流程准备工作：样品：过滤（0.45或0.22

3、μm滤膜）流动相：过滤（0.45或0.22μm滤膜），脱气,(注意：超声脱气时，水太热了要换)仪器主要包括四个模块：流体输送单元（SolventDeliveryModule）；微流控制单元（MicroFlowControlModule）；高压电源（HighVoltageModule）；检测器（DetectionModule）和数据采集软件。各部分分别开关、设置工作参数和程序。使用温度10-35℃，相对湿度不大于75%。可以进行毛细管微柱色谱、毛细管电色谱、加压毛细管电色谱、毛细管电泳分析。各单元参数设置及操作1．溶剂输送单元1．1参数设置：反复按FUNC/BACK键至显示所要设置的参数，按

4、数字键输入后，ENTER确认；设置下一参数，主要参数设置完成，按CE回到初始画面。常用参数包括流速FLOW（正常流速为0.02-0.05mL/min,如果在这个流速范围内进样量太大，就增加流速；反之就减小流速）、最高、最低限压P.MAX/P.MIN等（最低限压建议设置大于0的数值，否则漏夜、进气保护功能不能发挥作用）1．2输液方式1．2．1单泵恒比例送液：使用两个溶剂输送单元中的一个，按比例配好流动相并超声脱气，设置流速，按PUMP开始输液1．2．2双泵恒比例送液：一种方式是分别在两个溶剂输送单元上分别设置流速，输送需要混合的A、B两种溶剂；另一种方法是设置主泵和从泵：FUNC/BACK滚

5、动至SYS项，将主泵设为2，（从泵此项为1），此时主泵面板上的G.E.灯亮，在主泵面板上设置两种溶剂的比例CONC和总流速FLOW后，按主泵PUMP开始送液（注意，辅泵的流速是总流速乘梯度的比例后的值，此值最好不要小于0.005mL/min,否则辅泵流速不稳，影响梯度基线）1．2．3编辑梯度送液程序：在主泵上设置流速FLOW、基本输液比例CONC，编辑时间程序：EDIT进入编辑状态，输入时间数值，滚动FUNC/BACK到BCNC输入B相的梯度比例数值，按ENTER确认。常用的参数如BCNC（A、B液比例）、FLOW（流速）、STOP（停止程序）…等。程序编好后，反复按ENTER查看，按DE

6、L清除错误的程序步。按主泵RUN键运行时间程序,关掉RUN键，泵按梯度初始化条件走。确认各溶剂系统互溶、缓冲溶液中溶质不会析出结晶！1．3系统排气或快速更换溶剂系统把泵的吸滤头放进已经过滤并除气后的流动相中，加电时出口缓冲瓶中也装满相同的缓冲溶液。将Drain阀向OPEN方向（逆时针）旋转180度，按Purge键，约3分钟后自动停止，也可自己调整Purge时间，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止。CloseDrain阀。把流速调成1ml/min，把四通处连接反压阀的peek螺丝松开，十分钟后再把流速调成0.05ml/min,把反压阀的peek螺丝拧紧。2．紫外-可见检测器开启电源后，

7、经过短暂的时间，氘灯点亮，波长显示为254nm。(不一定是254nm，而是上次关机时使用的波长)，按FUNC/BACK键到改波长处，输入实验需要的波长值，ENTER确认，检测器一般30-60min的预热，然后按ZERO基线调零后，基线稳定后，可以进样。注意：开色谱软件前要把微流控单元的开关打开。否则软件打不开。3．高压电源输出电压：0-30kV；电流：0-100μA；最大功率：1W注意：当设置10kV以上电压时，应设置较