TGFβ1抗体对肝星状细胞Ⅰ型胶原及TIMP1基因表达的影响

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。研究生签名：雀书香研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工篮激得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等写的研究成果，指导教师对文责自负。研究生签名：意苇香中文摘要TGF．B1抗体对肝星状细胞I

2、型胶原及TIMP．1基因表达的影响摘要目的：肝硬化是多种慢性肝病发展的共同结果，也是一个世晃性的治疗难题，晚期肝硬化出现肝功能减退，门脉高压和多种并发症，威胁着患者的生命，目前唯一有效的治疗方法就是肝脏移植，但由于供肝的缺乏和手术费及终身接受抗排斥药物治疗的费用，使得肝移植不能普遍开展。肝硬化的病理学基础是肝纤维化，而肝纤维化早期是具有可逆性的，因此，近年来的研究主要是针对抗肝纤维化的治疗。肝纤维化形成的实质是肝脏的创伤愈合反应。发生肝纤维化的机制可能是肝星状细胞(HSC)受肝脏的致病因子刺激激活，分泌大量的细胞外基质(ECM)，并引起基质金属蛋白酶(MMPs)和金属

3、蛋白酶组织抑制剂(TIMPs)平衡失调及抑制HSC凋亡的发生。HSC的活化决定肝纤维化的形成、发展及转归，是肝纤维化的关键，而转化生长因子．B，(TGF．B，)是迄今所知道的在肝纤维化的启动、进展乃至肝硬化的形成中发挥核心作用的细胞因子。TGF—B1既能活化HSC，促使其分泌更多的TGF．B】，形成TGF．B1和HSC的恶性循环，又能促进基质合成并抑制其降解，同时抑制肝细胞再生，促其凋亡，它还通过对与肝纤维化有关的其他生长因子及调节基质代谢的酶类施加广泛影响，起到了致肝纤维化的作用。而TGF．B1抗体可中和HSC产生的过多的TGF．B1因子，拮抗TGF．B1的致肝纤维

4、化作用。国内外已对TGF．131中文摘要在HSC、细胞因子网络、MMPs、TIMPs、纤溶酶中的作用等方面做了较为深入的研究，但由于其体系的复杂性，如何发挥TGF．13】的积极作用，抑制TGF．131的促纤维化作用仍是今后科研工作中的一大重点。本研究旨在探讨TGF．131抗体对活化的HSC中纤维性胶原、TIMPs的影响，以期进一步证实TGF．B，抗体在肝纤维化逆转中的作用，对研究肝纤维化的发生、发展及其临床治疗具有重要的意义。方法：本课题以大鼠肝星状细胞HSC．T6为研究对象，把培养的HSC．T6接种于6孔板上，分为6组，设正常空白对照组，TGF—B1(1lag／L)

5、干预组，在TGF．B1(11．1g／L)干预的基础上加入用培养基倍比稀释的不同滴度的TGF．B1抗体(1：100，1：200，1：400，1：800)，每组均培养6个孔，在24d'时后收集细胞，提取总RNA，用逆转录定量多聚酶链反应(RT-PCR)方法分别测定各组的I型胶原及TIMP．1的基因表达水平。结果：TGF．B1组I型胶原的基因表达水平较正常空白对照组明显升高(正常组0．405_+0．063，TGF．13】组0．740__．0．048，P<0．01)，在TGF．13】抗体1：100组干预后，I型胶原的基因表达水平较TGF．131组下降(1：100组0．557_

6、+．0．047，与TGF．131比较P<0．01)，但仍高于正常空白对照组(PO．05)；TGF．13】组TIMP．1的基因表达水平较正常空白对照组明显升高(正常组0．613±0．068，TGF—B1组0．925__．0．051，P<0．01)，在TGF．B】抗体1：100组干预后，TIMP．1的基因表达水平较TGF．13】组下降(1：100组0．703__．0．063，P<0．01)，但仍高于正常空白对照组(P

7、)，TGF—B】抗体1：200，1"400，1：800组干中文摘要预后，TIMP．1的基因表达水平较正常空白对照组及TGF．B1组均无明显差别(P>0．05)。结论：TGF．13，使I型胶原和TIMP一1的基因表达水平升高，促进了肝纤维化的发生，在TGF．B1因子干预的基础上，TGF．B1抗体滴度为1：100时可在一定程度上抑制I型胶原和TIMP．1的基因表达水平。因此，TGF．B，抗体可能通过抑制I型胶原及TIMP．1的基因表达，拮抗TTGF．B】的致肝纤维化作用，对肝纤维化的逆转起到了一定的治疗作用。关键词：肝纤维化；TGF．B1；TGF．B1抗