舒肝颗粒对大鼠肝星状细胞αSMA、TNFα、TGFβ1表达的影响

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1、舒肝颗粒对大鼠肝星状细胞Q．SMA、TNF．0【、TGF．13l表达的影响摘要目的：研究舒肝颗粒针对肝纤维化防治作用的机制。为了探讨舒肝颗粒对肝纤维化(HF)的逆转是否有作用，我们采用舒肝颗粒作用于体外培养的大鼠肝星状细胞(HSC)，研究其对HSC洳平滑肌动蛋白(Smoothmuscleactin，仅．SMA)、肿瘤坏死因子．仅(Tumornecrosisfactor-tx，TNF．0【)、转化生长因子．pl(Transforminggrowthfactor-131；TGF—p1)表达的影响，以探讨舒肝颗粒对HSC增殖与活化的影响及相关机制，为舒肝颗粒临床应用提供进一

2、步理论依据。方法：将肝星状细胞培养于含10％特级胎牛血清的RPMll640培养基，37℃、5％C02孵箱中培养。采用MTT法测舒肝颗粒不同浓度组(0．01mg／ml、0．02mg／ml、0．04mg／ml、0．08mg／m1)对细胞增殖情况的影响，根据结果将后续试验分组为空白对照组、舒肝颗粒O．01mg／ml组、舒肝颗粒0．02mg／ml组和肝颗粒0．04mg／ml组，干预体外培养的HSC24小时后，镜下观察各组细胞形态，用免疫组化法测定各组HSCo【．SMA表达情况，用放射免疫法测定各组HSCTNF．0【表达情况，用荧光定量PCR法测定各组HSCTGF．p。表达情况

3、。结果：1．舒肝颗粒四个浓度组的MTTOD值均低于空白对照组，0．01mg／ml与空白对照组之间HSC增殖差异无显著性意义(P>0．05)，其余各组与空白对照组之间HSC增殖差异有显著性意义(P<0．05)。2．镜下观察四组细胞：空白对照组HSC胞体扁平，伸展成膜状，呈肌成纤维细胞的改变：舒肝颗粒0．01mg／ml组，胞体伸展稍被抑制，胞体呈星形；舒肝颗粒0．02mg／ml组，HSC细胞形态介于舒肝颗粒0．01mg／ml组与舒肝颗粒0．04mg／ml组之间；舒肝颗粒0．04mg／ml组，能明显抑制细胞体伸展，胞体近梭形，类似于静止期形态。各组均未见核固缩或凋亡现象。3

4、．免疫组化法检测各组a．SMA表达情况：0t．SMA在各组均有表达，采用计算机图像分析系统免疫组织化学图像分析软件，所取参数为阳性细胞数计数比率。阳性信号为棕黄色或棕褐色，位于细胞浆的线粒体膜、内质网膜上，阴性组织呈现蓝色。同一盖玻片，取200×高倍视野下a-SMA显色摄取图像，用细胞计数软件作定量分析代表阳性细胞计数比率。空白对照组、舒肝颗粒0．01mg／ml组、舒肝颗粒0．02mg／ml组及舒肝颗粒0．04mg／ml组阳性表达率用均数±标准差表示分别为(62．83±3．42)％、(47．31±2．74)％、(37．79±3．01)％、(25．744-2．83)％，

5、各组与空白对照组相比较差异有统计学意义(P0．05)，空白对照组与舒肝颗粒0．02mg／ml组、0．04mg／ml组组间比较差异有统计学意义(尸

6、PCR法测各组TGF．13I的表达情况：空白对照组、舒肝颗粒0．01mg／ml组、舒肝颗粒0．02mg／ml组及舒肝颗粒0．04mg／ml组TGF．pl表达水平通过计算2-zxact值用均数±标准差表示分别为：(1．00±0．09)、(O．714-0．08)、(O．55±0．07)、(O．44±0．03)，且组间差异有统计学意义(尸

7、CTGF．pl表达。关键词：舒肝颗粒；肝星状细胞；大鼠；肝纤维化；TGF-Pl：0【一SMA；TNF—QEffectofshugangranuleonExpressionofQ—SMA、TNF一仅andTGF—PiofHepaticStellateCellsinRatAbstract：Objective：Shugangranulemainlypreventsandtreatsthealcoholicliverdisease(ALD)，inparticularthealcoholofliverfibrosis(LF)．Inordertoexplorew