株鸡源新城疫病毒F基因特性分析

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1、畜牧与兽医2014年第46卷第12期·91·5株鸡源新城疫病毒F基因特性分析1112111刘一飞，马馨，王志宇，栗艳，王国艳，韩淑芳，张国权(1．山西省农业科学院畜牧兽医研究所，山西太原030032;2．山西省长治市畜牧兽医局，山西长治046000)摘要:为调查山西省鸡源新城疫病毒(NDV)的流行现状，2012—2013年从山西省部分地区的发病鸡群分离、鉴定出5株NDV，并对这5株NDV的分子生物学特性进行了研究。对各分离株F基因序列的分析表明:其中的4株病毒在基因型分类上属于基因Ⅱ亚型，并与标准弱毒疫苗112117LaSota株高度同源，为99.2%～99.4%。氨

2、基酸序列同源性为100%，且裂解位点氨基酸序列为G－Ｒ－Q－G－Ｒ－L，符合弱毒株裂解位点特征。另一分离毒株在基因型分类上与JS/5/01/Go同属基因Ⅶd亚型，两者基因序列同源性为95.6%，氨基酸序列同源性为97.5%。其裂解位112117点氨基酸序列为Ｒ－Ｒ－Q－K－Ｒ－F，为强毒株裂解位点特征。关键词:鸡;新城疫病毒;F基因;特性中图分类号:S855.3文献标志码:B文章编号:0529－5130(2014)12－0091－04新城疫是由新城疫病毒(Newcastlediseasevirus，1材料与方法NDV)引起的一种侵害禽类的急性、高度传染性疾病。自192

3、6年被确诊以来，在世界范围内广泛传播，1.1主要材料和试剂给养禽业带来巨大损失，被世界动物卫生组织病料采自2012—2013年山西省部分地区疑似新(OIE)确定为必须报告的动物疫病。我国目前采取城疫的病死鸡;NDV阳性标准血清，购自中国兽药［1－2］的预防策略为强制疫苗免疫。近30年来，多种监察所;9～10日龄SPF鸡胚购山西省太谷县种鸡新城疫传统活疫苗和灭活疫苗对我国新城疫的传播起场;病毒检测用ＲNA提取试剂盒(TIANampＲNA到一定的控制作用，新城疫的发病率大为降低。但由KitforVirusdetection)、Quant一步法ＲT－PCＲ试剂于养殖规模的逐

4、渐扩大、养殖密度不断增加，多种禽盒(QuantOneStepＲT－PCＲKit)购自天根生物技类混养，特别是各种疫苗的长期频繁使用，使NDV术公司。在疫苗免疫压力下，出现基因突变、免疫逃避等现1.2病毒的分离鉴定象，进而导致一些高抗体水平的免疫鸡群暴发非典型病料的处理、病毒的鸡胚培养及分离鉴定等参照［3］性新城疫。分子流行病学研究显示，我国目前流文献［5］。行的NDV以基因Ⅶ型为主，同时兼有Ⅱ、Ⅲ、Ⅵ、1.3F基因部分片段的扩增和测序［2－3］Ⅸ等其他基因型的散发。目前认为，新城疫疫苗根据NCBI发表的NDVF基因(FJ969394)全序株与流行野毒株之间的基因型和抗

5、原性差异是使免疫列，使用PrimerPremier5，针对其47～435bp的高变鸡群感染强毒的主要原因。虽然NDV只有一个血清区设计1对特异性引物—上游引物:ACATCAGGAG-型，但大量研究数据表明，NDV不同疫苗株与分离GAGAACGG;下游引物:CTTACCTACGGCAACAGC，［4］株间已发现一定的抗原性差异。因此，为了解山用以扩增94～457bp的包含裂解位点区约362bp的西省近年NDV流行株与疫苗株间的基因型差异，本片段。按照TIANampＲNAKitforVirusdetection操作研究分离、鉴定出5株NDV流行株，对其F基因高说明书，从收

6、获的尿囊液中提取NDV基因组ＲNA。变区进行序列分析，并与常用疫苗株、标准强毒株相ＲT－PCＲ参照QuantOneStepＲT－PCＲKit的反应体应序列进行同源性比对和系统进化分析，确定该5株系和扩增条件。将PCＲ产物经1%琼脂糖凝胶电泳检分离株属于基因Ⅱ、Ⅶ型NDV。试验结果为有针对测后，交由北京奥科生物技术公司正反测序。性地选择市售疫苗防控NDV提供参考依据。1.4序列分析利用基因分析软件DNAStar7.1对测定的序列及收稿日期:2013－10－11由其推导的氨基酸序列进行分析，并与I～IX基因型基金项目:山西省农业科学院畜牧兽医研究所级课题NDV各代表株相应

7、基因核苷酸序列及氨基酸序列进(XMS1001)行同源性分析。作者简介:刘一飞(1982－)，男，助理研究员，硕士，从事畜禽疾病防控研究，E-mail:liu_tmac@163.com·92·AnimalHusbandry＆VeterinaryMedicine2014Vol.46No.12K，121处为V。而其他NDV分离株的氨基酸序列在2结果101和121处皆分别为Ｒ和I。初步表明SX－12－32.1病毒的分离鉴定分离株为基因型VII型。5份病料接种SPF鸡胚，鸡胚于48～72h死亡，全胚呈弥散性出血。盲传4代后无菌收获鸡胚尿囊液进行血凝和血凝抑制试