微生物实习总结

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1、华南农业大学2012《微生物学》教学实习总结专业：植物保护（微生物工程方向）指导老师：纪春艳，阮小蕾，卓侃课程名称：微生物教学实习班级：09植保微生物2班实习时间：2012.04.23-04.27（第十周）学号:200930200619学生姓名王艳丽一、实习实验内容（一）土壤微生物的分离、培养及识别1.实验目的和内容目的：1）掌握从土壤中分离微生物的方法2）掌握常用的分离纯化微生物的操作技术内容：1）用稀释法分离细菌、放线菌和霉菌2）用平板划线方法分离微生物3）斜面接种及穿刺接种2.实验原理①从混杂的微生物群体中获得只含有某一

2、种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化，方法有：单细胞挑取法、平板划线法和稀释倒平板法。本实验利用稀释倒平板从土壤中分离细菌、放线菌和霉菌。基本原理为：将含有各种微生物的土壤悬浮液进行稀释后涂布接种到各种选择培养基平板上，在不同条件下培养，从而使各种微生物在各自的培养基上形成单菌落。单菌落是一个细胞繁殖而成的集合体，即是一个纯培养。②平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散为单个细胞，取一定量的稀释样液接种到不同选择性培养基的平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，进行平板菌落计

3、数。3.实验材料1)培养基已灭菌的牛肉膏、高氏一号、查氏培养基。2)仪器及用具99mL无菌水1瓶，含9mL无菌水的试管6支，80%乳酸，95%乙醇，无菌培养皿，1mL无菌移液管，土壤样品、天平、称量纸、钥匙、试管架、涂布器。4.操作步骤（一）土壤稀释分离法分离纯化细菌、放线菌和霉菌1.土壤样品采集待测地块上，若地块面积小于50平方米，对角线三点采样，若大于50平方米，对角线五点采样。一般定点于耕作层0--20cm，先除去表土1--2cm，以无菌铲采土足量充分混匀后用无菌塑料袋分装。2.无菌操作制备土壤稀释液1)制备土壤悬液：称

4、取土样1g，迅速倒入含有99mL无菌水的三角瓶中，振荡5~10min，使土样充分打散，即成10-2的土壤悬液。2)稀释：用无菌移液管吸10-2的土壤悬液1mL，吹入9mL无菌水即成10-3稀释液，如此重复，可依次制成10-3~10-8的稀释液。注意：操作时管尖不能接触液面，每一个稀释度换用一支移液管，每次吸入土液后，要将移液管插入液面，吹吸3次，每次吸上的液面要高于前一次，以减少稀释中的误差。3.涂布法测定菌落数的方法1)涂布法：将0.1~0.2mL菌悬液滴在平板表面中央位置，右手拿无菌涂布器平放于平板表面，将菌液先沿一条直线

5、轻轻来回推动，使之均匀分布，然后改变方向沿另一垂直线来回推动，平板边缘可改变方向用涂布器再涂布几次。2)接种量和培养基：细菌：取10-6、10-7、10-8两管稀释液各0.2mL，分别接入两个牛肉膏蛋白胨琼脂平板中，涂布均匀。放线菌：取10-2、10-3、10-4两管稀释液，在每管中加入10%酚液5~6滴，摇匀，静置片刻，然后分别从两管中吸出0.2mL加入高氏1号培养基平板中，涂布均匀。霉菌：取10-2、10-3、10-4两管稀释液各0.2mL，分别接入查氏培养基中，涂布摇匀。4.培养将接种好的细菌、放线菌、霉菌平板倒置，即皿

6、盖朝下放置，于28~30℃中恒温培养，细菌培养1~2d，放线菌培养5~7d，霉菌培养3~5d。观察生长的菌落，用于进一步纯化分离或直接转接斜面。5.划线分离细菌用接种环从待纯化的菌落或待分离的斜面菌种只沾取少量菌样，在相应培养基平板中划线分离。划线的方法多样，目的是获得单个菌落。常用的划线方法有两种：连续划线和分区划线。6.穿刺接种霉菌用接种针将培养出的霉菌挑出，接种到新的查氏培养基上。5.注意事项1)一般土壤中，细菌最多，放线菌及霉菌次之，而酵母菌主要见于果园及菜园土壤中。故从土壤中分离细菌时，要取较高的稀释度，否则菌落连成

7、一片不能计数。2)在土壤稀释分离操作中，每稀释10倍，最好更换一次移液管，使计数准确。3)放线菌的培养时间较长，故制平板的培养基用量可适当增多。6.实验结果与分析①本小组任务是用涂布法分离土壤中的真菌，选用的是查氏培养基，因细菌长势比真菌快，且培养基中未加链霉素、抗生素等抑制细菌生长的物质，因此本次实验用于分离的9个培养皿全部长出了细菌，只有处理浓度为10-4土壤悬液中的一个皿中长出了少量真菌（即霉菌）菌落。②划线法分离细菌：其中一个皿划线重复，未达到划线稀释的目的，最后没有长出单菌落，另一个皿虽划线无重复，但是划线次数较少，

8、也没有分离出单菌落。③霉菌分离：接种的地方有霉菌菌落长出，但其他地方也有霉菌菌落，分离结果不好。（二）水的细菌学检查——细菌总数的测定1．目的要求通过实验掌握水样的采集和水样中细菌总数的测定方法。2.实验原理1)水中细菌总数的测定水中的细菌总数越多，说明水中有机物的含量就越高