小檗碱对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

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1、小檗碱对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响【摘要】目的：观察小檗碱对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的培养大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响。方法：将组织贴块法培养的大鼠PASMCs随机分为对照组，AngⅡ模型组，小檗碱高、中、低剂量组，硝苯地平组和溶剂组。用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法检测各组PASMCs的生长情况，以流式细胞术检测细胞周期构成比和增殖指数(PI)，以乳酸脱氢酶(LDH)法检测小檗碱对细胞的毒性作用。结果：小檗碱可明显降低AngⅡ诱导PASMCs的增殖能力，使PASMC3的G0/G1期构成比显著升高(P<005)，PI显著下降(P<

2、;005)，且对PASMCs释放LDH无影响。结论：小檗碱能抑制AngⅡ诱导的PASMCs增殖，且与细胞毒性作用无关。【关键词】血管紧张素Ⅱ肺动脉平滑肌细胞肺动脉高压小檗碱增殖［Abstract］Objective：Toinvestigatetheeffectofberberineonproliferationofpulmonaryarterysmoothmusclecells(PASMCs)inrats.Methods：PASMCsculturedbytissue_stickingmethodwererandomlydividedintocontrol，mod

3、el，berberine(105～107?mol/L)，nifedipine，andvehiclegroups.Thecellsproliferationabilitiywasdeterminedbymono_nuclearcelldirectcytotoxicityassay.Thecellcyclewas11analyzedbyflowcytometry.Results：Berberinesignificantlyinhi_bitedtheproliferationofPASMCs，andup_regulatedsignificantlytheconstitu

4、entratioofPASMCsG0/G1cellcycle，anddown_regulatedproliferationindex.Conclusion：BerberineantagonizestheproliferationofPASMCsinducedbyangiotensinⅡ.［KeyWords］angiotensinⅡ；pulmonaryarterysmoothmusclecell；pulmonaryhypertension；berberine；proliferation肺动脉高压的发病机制尚不十分清楚，目前亦无满意的治疗方法。它的两大基本病理改变是肺

5、血管收缩和肺血管平滑肌构型重建，因此，抑制肺血管收缩，改善肺循环血流动力学以及阻止肺血管平滑肌细胞增殖、增强是治疗其关键［1～3］。钙拮抗剂(硝苯地平等)是近年来临床常用的抗肺动脉高压药物，与在逆转肺动脉高压时血管构型重建方面的机制和抑制细胞内游离Ca2+浓度的增高有关。小檗碱是一种异喹啉生物碱，能抑制小肠黏膜分泌，扩张血管，抗血小板凝集及改善肺缺血再灌损伤等。它也是一种钙拮抗剂，能抑制神经细胞、心肌细胞、平滑肌细胞等细胞内游离Ca2+浓度的增高［1～4］。有报道，平滑肌细胞的增殖与细胞内游离Ca2+浓度的增高有关，且平滑肌细胞的异常分化与增殖是血管重构，肺动脉高

6、压等发生、发展的基础。本实验旨在研究小檗碱对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ11)诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响。1材料与方法11实验动物SD大鼠［广州第一军医大学动物中心提供］12只，雌雄不拘，体质量200～250?g。12药品及器材小檗碱，硝苯地平(上海第十七制药厂，中国。实验前用DMSO溶解配成)，AngⅡ(Sigma公司，美国)，胎牛血清，M199培养基、胰蛋白酶(Sigma公司，美国)，凯基MTT细胞增殖检测试剂盒以及细胞周期检测试剂盒(凯基生物科技发展有限公司，中国)；乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒(南京建成生物工程研究所，中国)；倒置相

7、差显微镜(上海光学仪器厂，中国)；超净工作台(苏州净化设备有限公司，中国)；CO2培养箱(ThermoForma公司，美国)，multiskanspectrum酶标仪(ThermoLabsystem公司，芬兰)；FACSCalibur流式细胞仪(BectonDickinson公司，美国)。13大鼠PASMCs制备11大鼠PASMCs制备见参考文献［5，6］，但稍加改进：无菌条件下迅速取出大鼠体内肺动脉片段，按组织贴块法将平滑肌组织块移入培养瓶，加入M199培养液(含体积分数20%的胎牛血清)，于37?℃培养箱密闭培养，静置5?d左右可见细胞从组织块周围呈梭形生长

8、出来，换液