杜仲木脂素对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响及其机制

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1、中图分类号——UDC．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．——硕士学位论文学校代码——密级——杜仲木脂素对血管紧张素II诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响及其机制EffectsandthemechanismoflignansfromEucommiaulmoidesonratmesangialcellproliferatiqinduceddesonratcellproliferationduced—bvAngII作者姓名：学科专业：学院(系、所)：指导教师：论文答辩日期型弓、岁、7旦『

2、又尿贝临床药理学临床药理研究所欧阳冬生教授)答辩委员会主席盐幽a

3、盏)／中南大学2013年04月原创性声明lIIIIIIIlUllUlIIIIIY2425435本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论

4、文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：兰珏导师签名期：硕士学位论文中文摘要杜仲木脂素对血管紧张素II诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响及其机制摘要：目的：研究杜仲木脂素对血管紧张素II诱导的大鼠‘gIIJ,球系膜细胞增殖的影响及其机制。方法：采用大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)作为实验材料，实验共分为6组：空白对照组、AngII诱导模型组(10一mol／LAngII)、醛糖还原酶抑制剂依帕司他组(10。8mol／LAngII+2

5、0gmol／L依帕司他)以及低浓度(10诺mol／LAngII+20mg／L杜仲木脂素)、中浓度(10。8mol／LAngII+40mg／L杜仲木脂素)和高浓度杜仲木脂素组(10{mol／LAngII+80mg／L杜仲木脂素)。各组细胞在含10％胎牛血清培养基中孵育24、36、48h，采用MTT一步法检测OD490值来评估细胞数目；采用流式细胞仪检测各组细胞周期和细胞凋亡；采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法和蛋白质印迹(Westernblot)法检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂一P21、P27、细胞凋亡相关基因．Bax、Bcl．2和醛糖还原酶(AR)的mR

6、NA和蛋白表达水平；采用紫外法检测细胞内AR的活性。结果：(1)与对照组相比，模型组在含10％胎牛血清培养基中孵育48h，细胞数目显著增加，差异具有统计学意义(1．914-O．06VS1．49士O．08，尸<0．001)；与模型组比较，依帕司他和不同浓度木脂素组细胞数目减少，差异均具有统计学意义(1．604-0．04，1．604-0．03，1．58士0．07，1．524-0．04w1．914-0．06；P值均小于0．001)。提示AngII可促进大鼠肾小球系膜细胞增殖，依帕司他和杜仲木脂素可抑制增殖。(2)与对照组相比，模型组G，期细胞比例明显减少(69．2％4-0．3％

7、坩73．9％4-0．6％，P=0．024)，S期细胞明显增多(22．4％4-1．1％w12．6％土0．2％，P<0．001)，差异均具有统计学意义；与模型组相比，依帕司他组和不同浓度杜仲木脂素组可抑制细胞进入S期，S期细胞比例明显下降(11．1％4-0．4％，14．0％土0．6％，10．1％4-0．2％，7．1％4-0．7％w22．4％士1．1％；P值均小于0．001)，四组中高浓度杜仲木脂素组G．期的细胞比例增大具有统计学意义(76．4％士1．4％，73．5％4-2。5％，76．9％4-4．1％，77．6％4-0．7％w69．2％士0．3％；P=0．136，P=0．76

8、6，P=0．719，P=0．009)。提示AngII可以诱导静止细胞进入增殖活跃期，而依帕司他和杜仲木脂素可以阻止系膜细胞由G，期进入S期，将细胞阻滞在G，期，从TI硕士学位论文中文摘要而抑制增殖。(3)与对照组相比，模型组P21、P27mRNA水平显著降低(P21：0．314-0．01w1．00士0．03，P<0．001；P27：0．30士0。03VS1．00士0．02，P<0．001)，差异均具有统计学意义；与模型组相比，依帕司他组和不周浓度杜仲木脂素组P21、P27mRNA水平均显著高于模型组(P21：1．38士O．07