恶性血液病患者侵袭性真菌感染的早期诊断研究

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1、中文摘要目的：侵袭性真菌感染(IFI)是免疫受损患者严重的并发症之一。恶性血液病患者由于接受大剂量化疗及免疫抑制等药物的治疗，长期处于免疫抑制状态，因而成为侵袭性真菌感染的高危人群。本研究旨在统计血液科恶性血液病并发IFI患者的临床特征，探讨早期诊断IFI的实验室检测指标(包括G试验、GM试验、真菌定量PCR)的诊断价值。材料与方法：选择2008年7月-2009年3月血液科恶性血液病伴发热患者，按照中国血液病／恶性肿瘤患者侵袭性真菌感染的诊断标准(修订版)统计确诊和临床诊断IFI患者的临床特征，定期进行G试验、GM试验和真菌定量PCR检测。采用真菌基因组DNA提取试剂盒提取12株曲霉菌和

2、14株念珠菌菌株验证真菌定量PCR的可靠性，提取患者EDTA抗凝血标本中血浆、淋巴细胞分离液获得的单个核细胞、红细胞裂解液处理后全血中的真菌DNA，通过定量PCR比较三种血液成分中真菌DNA含量的差异。将烟曲霉PCR产物进行纯化、连接pGEM—T载体、经过大肠杆菌克隆后，测序验证并获得真菌DNA标准品，进行定量PCR获得标准品曲线，对血液中真菌拷贝数进行定量测定。结果：IFI发病率在发热的恶性血液病患者中高达30％(42／140)，侵袭性念珠菌病(IC)和侵袭性曲霉菌病(n)的发病率分别为24．3％(34／140)和9．3％(13／140)。IFI患者中近一半(20／42)为急性白血病患

3、者，骨髓未达到完全缓解患者占59．5％(25／42)。G试验的敏感性、特异性、阳性预测值及阴性预测值在IA和IC患者分别为0．692，0．667，0．6，O．75和0．594，0．667，0．76，0．48。GM试验敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值在认患者优于G试验，分别为0．769，0．833，0．769，0．833。IA和IC患者定量PCR的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为0．778，0．9，0．875，0．818和O．875，0．9，0．933，0．9。真菌在血浆、单个核细胞和全血中的分布无统计学差异(胗O．05)。结论：IFI在发热的恶性血液病患者中发病率高，念

4、珠茵和曲霉菌是IFI的最常见的两大病原真菌。急性白血病是最容易合并IFI的恶性血液病，骨髓未达到完全缓解是IFI的高危因素。真菌实时定量PCR是早期诊断IFI的实验室检测方法，在队和IC患者中其敏感性和特异性均优于G试验和GM试验，真菌在中文摘要血浆、单个核细胞和全血中的分布是相似的，检测血浆中真菌DNA方法更为简便，可作为IFI诊断的初筛试验。关键词：恶性血液病侵袭性真菌感染G试验GM试验定量PCRabstractABSTRACTObjective：Invasivefungalinfections(IFI)isakindofthemostseverecomplicationsinimm

5、unocompromisedpatients．Afterhavingreceivedhi曲dosageofchemotherapeuticandimmunosuppressivedrugs，patientswithhematologicmalignanciesareinimmunocompromisedstateforalongtimeandbecomehi曲riskpopulationforIFI．TheaimsofthisstudyweretostudytheincidenceofIFIinpatientswithhematologicmalignanciesandevaluatet

6、hevalueoftheexperimentaltestsfortheearlydiagnosisofIFI，whichincludeGtest，GMtestandquantitativePCR(qPCR)．MaterialsandMethods：StudyonthepatientsofhematologicmalignanciesaccompaniedbyfeverfromJuly，2008toMarch，2009．UsingthediagnosiscriteriaofIFIforpatientswithhematologicdiseases／malignanttumor(revise

7、dedition)，weselectedprovenorprobableIFIpatientsofhematologicalmalignanciesandsumuptheirclinicalcharacters．PerformGtest，GMtestandqPCRtodetectfungalelementsinthebloodregularly．UsefungusgenomicDNAextractionkittoextractfun