昆明小鼠卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究

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1、梁成光昆明小鼠卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究昆明小鼠卵母细胞玻璃化冷冻保存的研究摘要本研究利用玻璃化冷冻技术保存昆明小鼠成熟卵母细胞，比较了不同的冷冻保护剂(cryoprotectantagent,CPA)和不同的冷冻解冻方法对卵母细胞存活率、受精率及囊胚率的影响，并利用胚胎移植技术得到了产仔的结果，为小鼠卵母细胞冷冻保存提供了简便有效的技术方法。1同一浓度的六种冷冻保护剂对卵母细胞的毒性作用。分别以甘油(GLY)、乙二醇(EG)、二甲基亚矾(DMSO),1,2一丙二醇(PrOH),GLY+PrOH,EG+DMSO作为冷冻保护液(vit

2、rificationsolution,VS)处理卵母细胞;对照组只经解冻液处理。结果显示EG+DMSO处理组的卵母细胞存活率(69.2%),受精率(47.3%)和囊胚率(38.8%)显著高于其它五组(P

3、G+20%DMSO两组之间没有显著差异(P>O.05)，它们的存活率(70.3%,65.0%)、受精率(58.7%,51.9%)和囊胚率(44.3%,40.5%)显著高于30%EG+30%DMSO处理组(P

4、40.8%),受精率(33.5%)和囊胚率(24.9%)显著高于其他三个处理组(P0.05),但都高于平衡10秒钟的处理组(P<0.01)。解

5、冻时在解冻液中各平衡5分钟内蒙古大学硕士学位论文和7分钟处理组之间的卵母细胞存活率(77.5%,75.5%)、受精率(58.5%,60.5%)和囊胚率(46.0%,43.6%)无显著差异(P>0.05)，但都高于各平衡3分钟的处理组(P<0.01).5在冷冻液和解冻液中平衡时的温度对卵母细胞冻存效果的影响。当在冷冻液中平衡的温度为250C、在解冻液中平衡的温度为25℃或37℃时，卵母细胞的存活率(74.6%,72.1%)、受精率(53.4%,50.6%)和囊胚率(42.6%,41.6%)显著高于在冷冻液中平衡时温度为370C、在解冻液

6、中平衡时温度为25℃或37℃的两个处理组(P<0.01)。6卵丘对卵母细胞冻存效果的影响。用透明质酸酶分别消化卵丘一卵母细胞复合体0分钟(未去卵丘)、5分钟(去掉约一半卵丘)、10分钟(去掉全部卵丘)，然后进行冻存和受精，结果显示，0分钟和5分钟这两个处理组的卵母细胞存活率(75.8%,73.0%)、受精率(50.3%,46.3%)和囊胚率(40.8%,36.2%)显著高于10分钟的处理组(P(0.01)。7卵母细胞解冻后在受精液中恢复不同时间对其冻存效果的影响。将解冻后的卵母细胞在受精液TYH中分别停留0分钟、15分钟、30分钟后再

7、进行体外受精，结果显示恢复15分钟和30分钟这两个处理组的卵母细胞受精率(84.4%,87.9%)和囊胚率(65.8%,67.6%)显著高于恢复0分钟的处理组(P<0.01)，但它们三者之间的存活率并无显著差异(P>0.05)a8不同冷冻方法对卵母细胞冻存效果的影响。分别用开放式拉管(OPS)法、尼龙环(Nylon-loop)法、微滴(Mini-drop)法冻存卵母细胞，结果显示这三种方法在卵母细胞的受精率(86.6%,82.8%,85.0%)和囊胚率(70.3%,65.0%,66.5%)上并无显著差异(P>0.05)，但OPS法和尼

8、龙环法在卵母细胞的存活率(75.6%,72.1%)上明显高于微滴法(P<0.01)。9移植结果。将由卵母细胞冻存并受精后得到的210枚囊胚分别移植到17只假孕母鼠子宫内，共有3只妊娠，产仔6只，总受胎率为2.9%.关键词