电针水沟对脑出血大鼠大脑皮质NPY调节作用的动态观察

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1、http://www.paper.edu.cn电针水沟对脑出血大鼠大脑皮质NPY调节作用的动1态观察孙国杰，杜艳军，孔立红湖北中医学院针骨系，武汉（430061）E-mail：sunguojie@sina.com摘要：目的：观察NPY在大脑皮层神经细胞和内皮细胞中的表达，探讨电针水沟对脑出血大鼠NPY调节作用的动态变化。方法：将健康青年Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、模型3h、24h、72h组、电针3h、24h、72h组，每组各10只。采用胶原酶Ⅶ诱发的大鼠尾壳核出血模型；电针组在诱导大鼠尾壳核出血模型的基础上，用26号、1寸不锈钢毫针电针“水沟”，接G6805－II电针

2、治疗仪（空白电极接大鼠耳朵），连续波，频率120次min，强度1mA，留针30min。造模麻醉醒后立即针刺1次，每隔24h再针刺一次，3天后取材。根据Bederson神经体征评分法进行综合等级评分，并采用免疫组化方法检测NPY在大脑皮层神经元和内皮细胞表达。结果：（1）造模麻醉醒后模型组与电针治疗组的神经缺损体征综合评分无明显差异（P＞0.05），且电针治疗组的神经缺损体征略高于模型组。电针治疗组经电针治疗后，其神经缺损体征综合评分逐时递减，与模型组比较有明显差异(p<0.05或p<0.01),与电针治疗前比较亦有明显差异(p<0.01)。（2）正常组与假手术组大鼠大脑皮层神经元和

3、内皮细胞有少量的NPY阳性表达；脑出血后3h大鼠大脑皮层NPY的阳性表达开始增高，24h呈最高峰，胞浆和突起浓染呈棕褐色，血管内皮细胞细胞质中有棕色颗粒，72h时有所下降，与正常组比较均有显著性差异（P<0.01）。电针组大鼠大脑皮层神经元和内皮细胞的NPY阳性表达，也于3h开始表达，于24h表达较高，72h表达减弱，与模型组比较均有显著性差异（P<0.01），与正常组比较P<0.05。结论：电针水沟穴能有效抑制脑出血后3h、24h、72h时大脑皮质神经元和血管内皮细胞NPY的表达增强，改善脑出血大鼠的行为体征。但提示脑出血后不同时间段NPY对血管内皮细胞的作用效应机制可能是今后脑

4、出血防治研究的新问题。关键词：神经肽Y，脑出血，针刺疗法，水沟近年来，越来越多的临床资料表明血肿扩大及其继发性脑损害才是导致病情加重甚至死亡的主要原因，脑血管的舒缩功能则直接影响脑出血后血液的循环与调节。目前关于神经肽Y(NPY)在脑血管内皮细胞的作用研究较少，本实验将采用免疫组化方法，观察NPY在大脑皮层神经细胞和内皮细胞中的表达，初步探讨电针水沟对脑出血大鼠脑血管神经调节的动态影响。1材料与方法1.1动物与试剂健康青年Wistar大鼠（湖北省医学科学研究院实验动物中心提供）80只，体重200～250g，雌雄各半。查随机数字表，分为正常组（10只）、生理盐水组（10只）、模型组（

5、30只）、电针治疗组（30只）。再依同样的方法将模型组、电针治疗组分别分为3h、24h、72h，3小组，每组10只。SABC试剂盒和兔抗大鼠NPY单克隆抗体购自武汉博士德生物工程有限公司。1.2动物模型制作[1]采用胶原酶Ⅶ诱发的大鼠尾壳核出血模型。动物经6%水合氯醛腹腔麻醉（400mg/kg），1本课题得到高等学校博士学科点专项科研基金（20040507004）的资助。-1-http://www.paper.edu.cn头顶备皮后将动物固定于脑立体定位仪（WDT-Ⅱ微电极推进器脑立体定位仪，国营西北光学仪器厂）上，正中矢状切开头皮，剥离骨膜，调节门齿托的高度，使动物的前、后囟处于

6、同一水平。以前囟为坐标原点，向后1.0mm，向右4.0mm，确定注射点坐标，用手动微型钻（直径1.0mm）在注射点钻透颅骨。用1ul的微量注射器吸取0.8ul的胶原酶溶液（Sigma，typeⅦ，0.5unit/ul），缓慢进针5.0mm，缓慢注射后留针2min，缓慢退针，钻孔处填入明胶海绵止血。缝合皮肤，腹腔注射氨苄青霉素8万单位，动物清醒后放回笼内饲养。1.3治疗方法在诱导大鼠尾壳核出血模型的基础上，用26号、1寸不锈钢毫针电针“水沟”，接G6805－II电针治疗仪（空白电极接大鼠耳朵），连续波，频率120次min，强度1mA，留针30min。造模麻醉醒后立即针刺1次（麻醉手术

7、后约40min苏醒），每隔24h再针刺一次，3天后取材。1.4检测方法1.4.1根据Bederson神经体征评分法进行综合等级评分。0级：无任何行为异常，无缺损体征；1级：左前肢屈曲；2级：无旋转运动，但对来自右侧推力的抵抗力减弱；3级：对来自右侧推力的抵抗力减弱的同时，出现向左侧的旋转运动。1.4.2每组大鼠均用6％水合氯醛腹腔注射麻醉，开胸经升主动脉依次灌入生理盐水100ml、4℃预冷的含4％多聚甲醛的0.01mol/L磷酸缓冲液（PBS,pH7.4）400ml。