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《大肠杆菌色氨酸生物合成途径关键酶的调控》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、生物工程学报ChinJBiotech2008,May25;24(5):844-850journals.im.ac.cnChineseJournalofBiotechnologyISSN1000-3061cjb@im.ac.cn©2008InstituteofMicrobiology,CAS&CSM,Allrightsreserved研究报告大肠杆菌色氨酸生物合成途径关键酶的调控研究121431于金龙,王静,李剑欣,郭长江,黄英武,徐琪寿1军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京1008502河南中医学院基础医学院,郑州
2、4500083中国人民解放军306医院中心实验室,北京1001014军事医学科学院卫生学与环境医学研究所,天津300050摘要:为了通过基因工程手段提高大肠杆菌色氨酸产量,对色氨酸生物合成途径中的关键基因trpR、tnaA、aroG和trpED进行了改造。首先通过敲除trpR基因解除了基因组上色氨酸合成和转运关键酶受到的反馈阻遏调控,进而又敲除了tnaA基因,阻断了色氨酸的分解代谢。然后,将色氨酸合成途径的关键酶aroGfbr和trpEDfbr基因串联表达,以去除色氨酸生物合成途径的瓶颈。与对照MG1655相比,trp
3、R基因单敲菌色氨酸浓度提高了10倍,双敲菌色氨酸浓度提高了约20倍。pZE12-trpEDfbr转入双敲菌后色氨酸浓度提高到168mg/L,而将aroGfbr和trpEDfbr转入双敲菌后,色氨酸浓度提高到820mg/L。为构建色氨酸高产菌奠定了基础。关键词:aroG和trpED共表达,trpR和tnaA双敲除,色氨酸RegulationofKeyEnzymesinTryptophanBiosynthesisPathwayinEscherichiacoli121431JinlongYu,JingWang,Jianxin
4、Li,ChangjiangGuo,YingwuHuang,andQishouXu1InstituteofRadiationMedicine,AcademyofMilitaryMedicalScience,Beijing100850,China2SchoolofBasicMedicine,HenanCollegeofTraditionalChineseMedicine,Zhengzhou450008,China3TheCentreforExperimentalMedicine,306Hospital,Beijing100
5、101,China4InstituteofHygiene&EnvironmentalMedicine,AcademyofMilitaryMedicalScience,Tianjin300050,ChinaAbstract:ToimprovetryptophanproductioninEscherichiacoli,keygenesinthetryptophanbiosynthesispathway-aroG,trpED,trpRandtnaAweremanipulated.TrpRgenewasknockedoutto
6、eliminatetherepressiononthekeygenescontrollingtryptophanbiosynthesisandtransportationonbacteriachromosome,andthetryptophandegradationwasblockedbytnaAgeneknockout.Thenfbrfbrthebottleneckintryptophanbiosynthesispathwaywasremovedbyco-expressingaroGgeneandtrpEDgene.
7、ComparedwiththeMG1655,thetryptophanproductionoftrpRknockoutanddouble-genesknockoutstrainswasimproved10-foldsandabout20-folds,fbrfbrfbrrespectively.AfterthetrpEDwasexpressed,thetryptophanproductionincreasedto168mg/L,andwhenthearoGandtrpEDwereco-expressed,thetrypt
8、ophanproductionincreasedto820mg/L.Thisworklaidthefoundationforfurtherconstructionofhigher-efficientengineeredstrainfortryptophanproduction.fbrfbrKeywords:aroGandtrpED
