临床PCR试剂盒的选用和质检80

《临床PCR试剂盒的选用和质检80》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、卫生部临床检验中心李金明PCR或RT-PCR试剂盒的组成�核酸提取试剂�核酸扩增或逆转录-核酸扩增试剂�产物检测试剂�有些使用全自动分析仪的PCR方法因其核酸扩增和检测同时完成�故无专门的产物检测试剂�影响PCR试剂盒质量的因素�内在因素:原材料、核酸提取方法、方法学设计PCR�寡核苷酸引物和探针�缓冲液和dNTP�聚合酶、逆转录酶等PCR反应混合物2+和MgTaqDNA多聚酶或2+Mn和rTthDNA多聚酶dCTAmpErasPdGTePdUT生物素标记的引P物dATP寡核苷酸引物和探针�其对试剂盒质量的影响首先是纯度。纯度的判断可根据260/280吸光度比值来判断�如‹2.0�

2、则需重新纯化。另一种方法是将其在聚丙烯酰胺凝胶上电泳�如出现一条以上的带或迁移位置错误�则需重新纯化。�是否有污染。�结合特异性�浓度�dNTP和缓冲液�dNTP�包括dATP、dCTP、dGTP和dTTP或dUTP�的浓度�缓冲液�在储存和扩增循环中稳定、作为聚合酶活性所必须的Mg���或用于rTth的Mn���的浓度以及pH等逆转录酶、DNA聚合酶�酶的浓度�酶的活性核酸扩增方法�PCR�RT�PCR�转录依赖的扩增�TMA��连接酶链反应�LCR��链替代扩增�SDA�等PCR�核酸提取的有效性�核酸提取的简便性PCR�杂交固相�特异探针及其标记物影响PCR试剂盒质量的因素�

3、内在因素:原材料、核酸提取方法、方法学设计�外在因素�试剂盒的运输和贮存外在因素�试剂盒的运输和贮存试剂盒的运输和贮存�PCR试剂盒的有效期一般为6个月�这是指在适当的贮存温度下。核酸扩增部分的试剂一般要贮存于-20℃下�产物检测部分试剂则贮存于2�8℃。�试剂盒从厂家到用户手中�均要经历运输及运输中的贮存�任一环节的不当�均会影响试剂盒的临床使用质量。PCR试剂盒的分类�定性测定�PCR-ELISA、PCR-膜上杂交�杂交梳�、荧光PCR�分子信标和TaqMan等��定量测定�PCR-ELISA、TaqMan和Amplisensor荧光定量、AmplicorPCR-ELISA定量

4、等。PCR试剂盒的选用原则�参考试剂生产厂家的信息广告�参考同行对有关试剂盒的使用效果�参考有关机构的综合评价�根据使用目的�根据所在实验室的技术特点�根据所在医院患者的承受能力PCR试剂盒的质检�外包装�厂家名称、检测目的、批准文号、批号和有效期等。�内包装�试剂瓶是否漏液、真空包装是否破损以、试剂是否齐全以及是否有使用说明书等。PCR试剂盒的质检�采用血清�样本�盘�Panel�质检�PCR试剂血清�样本�盘由一定数量的原血清阴、阳性样本、2�3份纯化核酸�DNA或RNA或cDNA�样本以及3�5份系列稀释阳性样本所组成。样本总数可定在20份左右。�原血清样本用于判断试剂盒对特

5、定病原体核酸检出的特异性、灵敏度和符合率�纯化核酸样本用于判断DNA扩增或逆转录及DNA扩增的有效性�系列稀释阳性样本用于判断试剂的测定下限。试剂特异性、灵敏度和符合率计算公式试剂特异性、灵敏度和符合率计算公式�灵敏度����(a/a+c)�100%�特异性����(d/b+d)�100%�符合率����(a+d/a+b+c+d)�100%谢谢!K9H5E2B+x(u$rZoWkThQeMbJ7G4D1z-w*t!qYmVjSgOdLaI6F3B0y)v%s#pXlUiQfNcK8H5E2A+x(u$rZnWkThPeMbJ7G4C1z-w&t!qYmVjRgOdL9I6F3B0y

6、(v%s#oXlUiQfNbK8H5D2A+x*u$qZnWkShPeMaJ7F4C1z)w&t!pYmUjRgOcL9I6E3B0y(v%r#oXlTiQfNbK8G5D2A-x*u$qZnVkShPdMaJ7F4C0z)w&s!pYmUjRfOcL9H6E3B+y(u%r#oWlTiQeNbJ8G5D1A-x*t$qZnVkSgPdMaI7F4C0z)v&s!pXmUjRfOcK9H6E2B+y(u%rZoWlThQeNbJ8G4D1A-w*t$qYnVjSgPdLaI7F3C0y)v&s#pXmUiRfOcK9H5E2B+x(u%rZoWkThQeMbJ8G4D1z-w*t!

7、qYnVjSgOdLaI6F3C0y)v%s#pXlUiRfNcK8H5E2A+x(u$rZnWkThPeMbJ7G4C1z-w&t!qYmVjSgOdL9I6F3B0y)v%s#oXlUiQfNcK8H5D2A+x*u$rZnWkShPeMaJ7G4C1z)w&t!pYmVjRgOcL9I6E3B0y(v%r#oXlTiQfNbK8H5D2A-x*u$qZnWkShPdMaJ7F4C1z)w&s!pYmUjRgOcL9H6E3B+y(v%r#oWlTiQeNbK8G