共聚焦实验流程

《共聚焦实验流程》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、打开PSU（扫描器总电源）（先开电源，后开钥匙）（如果使用双扫描，同时打开ASU）打开电脑打开显微镜电源UCB开激光器（只开启使用的激光器）氩离子：458/488/515应用染料：GFP/FITC/Fluo3/Alexa488;CFP;YFP等HeNe绿：543应用染料：TRITC/MT/CY3/PI/Alexa546等HeNe红：633应用染料：CY5/Alexa647等双击进入共聚焦软件打开荧光汞灯光源注意“15分钟内勿开或关！！！”1共聚焦开机流程先开电源，后将开钥匙（从“0”转到“1”）LD405（main）：应用染料：D

2、API/Hoechst33258/BFP等（先开电源后开钥匙）LD405（SIM）：应用：光漂白、光刺激、光活化等研究（先开电源后开钥匙）如果不扫图像，可以只执行绿色部分流程关机流程基本上是上述过程的反方向，但关闭氩离子激光器时一定要注意：先将钥匙从“1”转到“0”，然后千万不要马上关闭电源，而是要等到风扇停止后再关闭氩离子。其他有钥匙的电源装置关机的顺序是先关钥匙，后关电源（没有等待风扇停转过程）。执行开机程序透射光：点击透射光观察按钮打开透射光“translamp”1选择合适物镜（油镜需要滴加镜油）2调节合适光强3适当调节物镜

3、下部的DIC旋钮2共聚焦取图流程粗、微调调节焦距，观察标本荧光：点击荧光观察按钮1选择合适的激发块2点击控制板上光闸按钮开/关光闸3调节汞灯光阑，调整到合适光强粗、微调调节焦距，观察标本对应激发块：WU:DAPI;WIB:FITC/GFP;WIG:TRITC共聚焦扫描选择染料或在512X512下预扫，调节焦距、zoom、角度和用LUT调节标本颜色、反差2Kalman：滤除随机噪音，次数越多降噪效果越好。在HV较高时使用。（另，降低扫描速度也能提高图质量）按下列事项设定获取图像模式后，按取图（同时可以与下列功能结合使用）1图像满足要

4、求时，尽量使用低激光强度。并通过PMTHV（增强图像信号），Gain（增强信号）和offset（扣除背景）调节图像。3Seq：如果双染或多染标本串色严重，在最后取图时，使用Seq模式，避免激发光串色。4Zoom：原则上尽量使用高数值孔径物镜取图。同时尽量使用ZOOM功能选择最合适大小的扫描区域。5选择合适的扫描分辨率。（如果取时间或Z轴图像，应选择相应的XYT或XYZ扫描方式）共聚焦显微镜使用注意事项和维护：1.使用油镜后要及时用擦镜纸沾擦镜液（30％乙醇、70％乙醚混合液）擦干净。2.遵守共聚焦系统的开机和关机流程，并注意严格遵

5、守氩离子激光器关机顺序！3.不要用手收硬扳动显微镜电动部件，调节显微镜手动部件时，用力要轻，遇到阻力时不要强行调节。4.尽量不要直接接触显微镜光学部件，不要弯折光纤。5.不要随意插拔电源。6.不要直视激光，以免损伤眼睛。7.使用完毕后，等待仪器（尤其是光源部分）冷却后再盖上防尘罩。8.如果外露光学部分如目镜、物镜和聚光镜被灰尘等污染，需要用擦镜液擦拭干净。