在线免疫亲和净化-液相色谱-串联质谱快速测定中草药及中成药中10种真菌毒素.pdf

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1、第39卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第9期2011年9月ChineseJournalofAnalyticalChemistryl341～1346在线免疫亲和净化一液相色谱一串联质谱快速测定中草药及中成药中10种真菌毒素赵孔祥葛宝坤陈旭艳许泓(天津出入境检验检疫局，天津300461)摘要将复合毒素免疫亲和柱的柱填料填充至不锈钢柱(35mm×4．6mm)，制成可重复使用的在线免疫亲和净化柱。在线净化过程的上样溶剂为磷酸盐缓冲液(PBS，pH7．4)，清洗溶剂为水，转移溶剂为乙腈水(1：1，V／V)。采用PBS

2、／甲醇溶液提取样品中真菌毒素，提取液直接进行在线免疫亲和净化一液相色谱一质谱／质谱分析，本方法可同时测定中草药及中成药中10种真菌毒素(伏马毒素B。、伏马毒素B、T一2毒素、HT一2毒素、赭曲霉毒素A(OTA)、玉米赤霉烯酮、玉米赤霉醇、玉米赤霉醇、一玉米赤霉烯醇和f}玉米赤霉烯醇)。本方法的定量限(LOQ)为1～5pg／kg，各基质在3个水平添加回收率(一6)为62．3％～107．1％；相对标准偏差(RSD)为2．1％～15．O％。关键词在线免疫亲和净化；中草药；中成药；液相色谱串联质谱；真菌毒素1引言近年来，中药中

3、存在的真菌毒素备受关注]。药用植物采集后如干燥不及时、贮存不当及制备与加工过程中处理不善，均可能污染各种真菌，并产生真菌毒素Ⅲ。在目前已发现的300多种真菌毒素中，黄曲霉毒素(Aflatoxins)、赭曲霉毒素(Ochratoxin)、玉米赤霉烯酮(Zearalenone)、伏马菌素(Fumonisins)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(De0xynivaleno1)、T一2毒素(T一2toxin)、杂色曲霉素(Sterigmatocystin)等B与人体健康安全相关。检测真菌毒素的方法有生物鉴定法、化学分析法、仪器分析法和免疫

4、分析法等】。近年来，抗原抗体特异性结合的免疫亲和层析技术，在真菌毒素及药物残留的前处理净化领域得到了广泛应用]。免疫亲和层析联用技术，也称在线(On-line)免疫亲和色谱，通过柱切换技术将免疫亲和净化柱串联于HPLC或HPLC—MS／MS进行检测，样品的纯化及分析均实现自动化[7]。肖付刚等采用免疫亲和层析液质联用法检测蓝藻中的微囊藻毒素。Moretti等将免疫亲和柱直接串联到分析柱上，测定了牛奶和肉中氯霉素。Be~amin等建立了免疫亲和净化与LC／MS或LC／MS／MS联用的克伦特罗检测方法。Holtzapple

5、等”使用高效免疫亲和色谱柱实现了血清中氟喹诺酮类药物在线净化。Liang等制备了在线拟除虫菊酯类杀虫剂的免疫亲和柱，实现复杂样品中此类化合物的高效、快速检测。本研究采用制备的在线免疫亲和净化柱，实现了中草药及中成药中的赭曲霉毒素A等10种真菌毒素的在线净化一液相色谱一串联质谱测定。本方法使用了高选择性的免疫亲和净化技术，降低了净化成本。2实验部分2．1仪器与试剂TSQQuantumUltraAM三重四极质谱仪、Turboflow在线液相色谱净化系统(两台Transcend600泵及CTC多功能进样器)，配有AriaOS

6、及Xcalibur操作软件(美国ThermoFisher公司)；振荡器(日本YAMATO公司)；3—18K高速离心机(德国Sigma公司)；MILLI—Q纯水器(美国Millipore公司)。复合毒素免疫亲和柱(myco6inl，美国Vicam公司)。甲醇、乙腈和甲酸(色谱纯，美国Dikma公司)；醋酸铵(色谱纯，天津光复精细化工研究所)；NaC1，201l—O1O4收稿；2011一O52O接受本文系国家质量监督检验检疫总局科研项目(No．2008IK144)资助E—mail：wwwkongxiang@163tom第3

7、9卷KC1，KH2PO，NaHPO·12HO，NaCI，HCI(分析纯，天津风船化学试剂科技有限公司)。磷酸盐缓冲液(PBS，pH7．4)。真菌毒素标准品：黄曲霉毒素B(AFB，纯度99％)、黄曲霉毒素B：(AFB，纯度99％)、黄曲霉毒素G。(AFG，纯度99％)、黄曲霉毒素G(AFG，纯度99％)、赭曲霉毒素A(OTA，纯度99％)、HT一2毒素(HT-2，纯度98％)、T一2毒素(T一2，纯度98％)、伏马毒素B，(FB，纯度99％)、伏马毒素B(FB，纯度99％)和玉米赤霉烯酮(Zearalenone，纯度为9

8、9％)，均购于美国Alexis公司；10mg／La一玉米赤霉醇(dZearalano1)、玉米赤霉醇(Zearalano1)、一玉米赤霉烯醇(dZearaleno1)和玉米赤霉烯醇(Zearaleno1)的乙腈溶液，均购于美国Biopure公司。2．2实验方法2．2．1在线免疫亲和净化原理在线免疫亲和净化技术通过柱切换技术将在线净