PDF-实时荧光定量PCR检测+HBV+DNA的线性范围与最低检出限的验证

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1、·２３６２·国际检验医学杂志２０１４年９月第３５卷第１７期ＩｎｔＪＬａｂＭｅｄ，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ２０１４，Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．１７·检验技术与方法·实时荧光定量ＰＣＲ检测ＨＢＶＤＮＡ的线性范围与最低检出限的验证张运洪，秦维超，何玲，黄建军（重庆市江津区中心医院检验科，重庆４０２２６０）摘要：目的试用实时荧光定量ＰＣＲ定量检测乙型肝炎病毒核酸（ＨＢＶＤＮＡ），求出其线性范围与最低检出限，从而对本实验室检测ＨＢＶＤＮＡ的主要性能进行验证。方法参照相关的文件，通过系列稀释高浓度标本得到超过厂家申明线性范围的系列浓度

2、标本，进行线性范围的验证；通过系列稀释低浓度标本得到超过厂家申明最低检出限的系列浓度标本，进行最低检出限的验证。结果ＨＢＶＤＮＡ检测的线性范围为８．５８×１０２７２～８．４１×１０ＩＵ／ｍＬ，最低检出限为４．０７×１０ＩＵ／ｍＬ。结论实时荧光定量ＰＣＲ检测ＨＢＶＤＮＡ的线性范围与最低检出限达到预期要求，检测方法和验证方案简便、可行。关键词：实时荧光定量聚合酶链反应；乙型肝炎病毒核酸；线性范围；最低检出限犇犗犐：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３４１３０．２０１４．１７．０４１文献标识码：Ａ文章编号：１６７

3、３４１３０（２０１４）１７２３６２０３犞犲狉犻犳犻犮犪狋犻狅狀狅犳狋犺犲犾犻狀犲犪狉狉犪狀犵犲犪狀犱狋犺犲犿犻狀犻犿狌犿犱犲狋犲犮狋犻狅狀犾犻犿犻狋犻狀狉犲犪犾狋犻犿犲犳犾狌狅狉犲狊犮犲狀犮犲狇狌犪狀狋犻狋犪狋犻狏犲犘犆犚犳狅狉犎犅犞犇犖犃犣犺犪狀犵犢狌狀犺狅狀犵，犙犻狀犠犲犻犮犺犪狅，犎犲犔犻狀犵，犎狌犪狀犵犑犻犪狀犼狌狀（犇犲狆犪狉狋犿犲狀狋狅犳犆犾犻狀犻犮犪犾犔犪犫狅狉犪狋狅狉狔，犑犻犪狀犵犼犻狀犆犲狀狋犲狉犎狅狊狆犻狋犪犾，犆犺狅狀犵狇犻狀犵４０２２６０，犆犺犻狀犪）犃犫狊狋狉犪犮狋：犗犫犼犲犮

4、狋犻狏犲Ｕｓｅｒｅａｌｔｉｍｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ（ＰＣＲ）ｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅＨＢＶＤＮＡ，ｔｈｅｎｃａｌｃｕｌａｔｅｔｈｅｌｉｎｅａｒｒａｎｇｅａｎｄｔｈｅｍｉｎｉｍｕｍｄｅｔｅｃｔｉｏｎｌｉｍｉｔ，ｗｈｉｃｈａｒｅｔｈｅｍａｉｎｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｉｎｄｉｃａｔｏｒｓｉｎｔｈｅｌａｂｏｒａｔｏｒｙｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ．犕犲狋犺狅犱狊Ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｒｅｌａｔｅｄｄｏｃｕｍｅｎｔｓ，ｂｙｓｅｒｉａｌｄｉｌｕｔｉｏ

5、ｎｏｆｈｉｇｈｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓａｍｐｌｅｓ，ｓａｍｐｌｅｓｏｆｓｅｒｉａｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｗｈｉｃｈｗｅｒｅｏｕｔｏｆｔｈｅｌｉｎｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔｉｏｎｅｄｉｎｔｈｅｉｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｓ，ｔｈｅｎｖｅｒｉｆｉｄｔｈｅｎｅｗｌｉｎｅａｒｒａｎｇｅ．Ｂｙｓｅｒｉａｌｄｉｌｕｔｉｏｎｏｆｌｏｗｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄ，ｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆｗｈｉｃｈｗｅｒｅｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈｅｍｉｎｉｍｕｍｄｅｔ

6、ｅｃｔｉｏｎｌｉｍｉｔｏｆｐｒｏｖｉｄｅｂｙｔｈｅｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅｒ，ｔｈｅｎｔｈｅｎｅｗｍｉｎｉｍｕｍｄｅｔｅｃｔｉｏｎｌｉｍｉｔｗａｓｖｅｒｉｆｉｅｄ．犚犲狊狌犾狋狊ＴｈｅｌｉｎｅａｒｒａｎｇｅｏｆＨＢＶＤＮＡｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｓ８．５８×２７２１０－８．４１×１０ＩＵ／ｍＬ，ａｎｄｔｈｅｍｉｎｉｍｕｍｄｅｔｅｃｔｉｏｎｌｉｍｉｔｏｆＨＢＶＤＮＡｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｓ４．０７×１０ＩＵ／ｍＬ．犆狅狀犮犾狌狊犻狅狀Ｔｈｅｌｉｎｅａｒｒａｎｇｅａｎｄｔｈｅｍｉｎｉｍｕｍｄｅｔｅｃｔｉｏｎｌｉｍｉｔｏ

7、ｆＲｅａｌｔｉｍｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲａｓｓｅｓｓｅｄｒｅａｃｈｅｓｔｈｅｅｘｐｅｃｔｅｄｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔ，ａｎｄｔｈｅｍｅｔｈｏｄａｎｄｖａｌｉｄａｔｉｏｎｓｃｈｅｍｅａｒｅｓｉｍｐｌｅａｎｄｆｅａｓｉｂｌｅ．犓犲狔狑狅狉犱狊：ｒｅａｌｔｉｍｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ；ＤＮＡ，ｈｅｐａｔｉｔｉｓＢｖｉｒｕｓ；ｌｉｎｅａｒｒａｎｇｅ；ｍｉｎｉｍｕｍｄｅｔｅｃｔｉｏｎｌｉｍｉｔ在本科室的实际工作中使用

8、实时荧光定量ＰＣＲ进行乙型号为２０１３０９０７／６。ＨＢＶＤＮＡ室内质控品购自北京康彻思坦肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＮＡ检测的精密度、准确度，能长期、稳定地公司，该质控品可溯源至ＧＢＷ（Ｅ）０９０１３７，具有低水平ＨＢＶ控制在理想水平。各水平室内质控和各级室间质评都能很好ＤＮＡ浓度。反应本实验室的精密度和准确度。另外，ＨＢＶＤＮＡ检测的线１．３方法性范围与最低检出限也是重要的性能指标。新型抗